实验二放线菌、真菌形态观察

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1、实验二放线菌、真菌形态的观察细菌芽孢染色目的要求学习观察放线菌和真菌形态的基本技术;加深对放线菌和真菌形态特征的理解;掌握细菌芽孢染色的方法。原理放线菌与真菌虽然都有分支状菌丝,但两者在系统发育学上分属两大界:放线菌---原核生物,16SrRNA;真菌---真核生物(低等),18SrRNA。链霉菌是放线菌的重要类群,其菌丝体分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝两部分,气生菌丝的顶端分化为孢子丝,生长到一定时期形成成熟的孢子。可用插片法观察链霉菌的孢子。酵母菌是单细胞真核微生物,其细胞比细菌细胞大,呈卵圆形或柱形。可制成水浸片在高倍镜下观察酵母菌的形态和繁殖方式

2、(芽殖)。原理(2)美蓝染色可区分死活细胞,因为在活细胞中美蓝被还原为无色,死细胞不能使美蓝发生还原反应,故死细胞呈现为蓝色。本实验中芽孢染色采用石炭酸复红初染(加热)和美蓝复染法,基于石炭酸复红为酸性染料,与菌体结合差,易被水冲洗掉,而芽孢中的复红染料却难以脱去(芽孢壁较厚,芽孢一旦着色后难以脱色)。结果是菌体被染成蓝色,芽孢呈红色。插片法高氏1号琼脂培养基倒平板无菌盖玻片斜插(45oC)入琼脂划线接种放线菌28oC培养6-7d取出盖玻片固定染色水洗镜检水浸片滴加吕氏美蓝于载玻片接种环取酵母培养物盖上盖玻片(防止气泡产生)镜检Streptomycessca

3、biesSaccharomycescerevisiae细菌芽孢染色绘图示青色链霉菌的气生菌丝、孢子丝;绘图示酵母菌的形态。思考题:为什么芽孢染色法中用酸性复红初染时需要加热并维持5min?

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