人乳铁蛋白对细胞增殖的影响

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1、人乳铁蛋白对细胞增殖的影响【关键词】人乳铁蛋白;癌细胞;细胞增殖　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectoflactoferrinonproliferationoftheculturedcellsinvitro.MethodsMTTassayanner，buthadnoeffectonthenormalcells.ConclusionsLactoferrinasaneopreventiveagentcouldsignificantlyinhibitthegroacells.　　【Keyanlactoferrin;C

2、arcinomacells;Cellproliferation　　人乳铁蛋白(HumanLactoferrin，hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁中特别是初乳中含量最高，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用〔1，2〕。国外有学者将其应用于肿瘤患者的治疗〔3〕，但是对其作用机制的研究较少。目前国内较少有关于hLF作用于细胞的报道，我们选用易早期转移的鼻咽癌(NPC)细胞作为研究对象〔4〕，以中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人肝脏细胞(L02)作为正常细胞对照，观察hLF在体外是否具有抑制癌细胞生长的作用，探讨hLF抗肿瘤的作用机制，从而为肿瘤的治疗提供研

3、究基础，为临床实验及应用提供新的理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料人鼻咽癌细胞(E)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人肝脏细胞(L02)均购自中国科学院上海细胞资源中心。重组hLF(Lot:L0520，溶于PBS中，储存浓度5mg/ml，-20℃储存备用)和噻唑蓝(MTT，Lot:M2128)均购自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清购自HyClone公司。其他试剂均为分析纯。　　1.2实验方法　　1.2.1细胞培养各细胞系均应用含10%胎牛血清和1%青链霉素的RPMI1640培养基，5%CO2，37℃培养。　　1.2.2MTT法检测细胞增殖设

4、空白对照组和hLF干预组。待细胞生长至对数生长期，接种于96孔细胞培养板，接种数为5×104/孔。每组细胞设5个平行孔，各组细胞分别加入不同浓度的hLF(0，1.25×10-3,2.5×10-3，5×10-3，10×10-3，20×10-3，40×10-3g/L)，每孔均为200μl。作用24h后，加入MTT(5g/L，每孔20μl)，继续培养4h，测定A570nm吸光度。　　1.2.3细胞形态观察细胞经hLF处理后，倾去上层悬浮死细胞并用PBS洗两遍，加入新鲜培养基。同样处理对照孔细胞，将细胞置于倒置显微镜下，观察细胞形态的变化。　　1.3统计学处理数

5、据用x±s表示，组间比较用方差分析。　　2结果　　2.1重组hLF对鼻咽癌细胞E、人肝脏细胞L02、中国仓鼠细胞CHO系的增殖能力的影响对E呈现剂量依赖性的抑制作用，而对正常细胞无抑制作用，见表1。表1人乳铁蛋白对各细胞体外增殖的影响与空白对照比较:1)P<0.05　　2.2细胞形态学观察显微镜镜下可见，空白对照组癌细胞密集成片生长，如铺路卵石状，细胞膜圆润，透明，颗粒较少，细胞间界限清楚，并可隐约见到细胞核。hLF处理组癌细胞形态发生明显的改变，随hLF浓度增加，细胞从正常的增殖旺盛的贴壁生长，逐渐表现为生长缓慢，黏附力降低，细胞变圆，细胞胞质粗

6、糙，细胞内颗粒逐渐增多，且透明度降低，立体感较差，细胞形态完整性受损，而正常细胞在　图1细胞镜检图hLF作用下无显著变化(见图1)。　　3讨论　　hLF多种生物学功能通过免疫系统的激活与调节得以实现〔5〕。Bezaul〔6〕研究发现，乳铁蛋白能抑制鼠实体瘤的生长和转移。肿瘤内注射LF，可以明显的减小实体瘤的体积，且作用效果与LF干预天数相关。研究〔7，8〕发现，乳铁蛋白的抗头颈部肿瘤作用是通过抑制肿瘤细胞增殖实现的。〕.北京:中国轻工业出版社，2000：110.　　2黄玉政，成勇，柏亚军，等.人乳铁蛋白转基因小鼠杂交选育的研究〔J〕.动物医学进展，20

7、07;28(6)：3943.　　3〕.北京：科学技术文献出版社，2007：3040.　　5CumberbatchM，DearmanRJ，UribeLunaS,etal.RegulationofepidermalLangerhanscellmigrationbylactoferrin〔J〕.Immunology，2000;100(1)：218.　　6BezaultJ，BhimaniR，onittoCL，MinhasKM,etal.LactoferrindoiensE，ElyazidiI，MazurierJ,etal.Lactoferrininhib

8、itsG1cyclindependentkinasesduringgroanb