志贺菌属微生物学检验

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1、志贺菌属微生物学检验温风华（黑龙江省双鸭山市宝山区人民医院155100}【关键词】志贺菌属；生化；检验【中图分类号】RA【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）42-0079-02志贺菌属是引起人类细菌性痢疾（简称菌痢）的病原菌，俗称痢疾杆菌。1生物学性状1.1形态与染色：志贺菌为革兰阴性杆菌，有菌毛，无芽胞，无荚膜，无鞭毛。1.2培养特性：志贺菌除宋内志贺菌个别菌株外，均不分解乳糖，故在肠道选择性培养基上形成乳糖不发酵、中等大小、无色半透明的光滑型菌落。1.3生化反应：志贺菌发酵葡萄糖产酸不产气；除宋内志贺菌个别菌株可迟缓发

2、酵乳糖外，其余均不发酵乳糖；志贺菌不分解尿素、不产H2S;IMViC试验结果为一/++。1.4抗原构造：志贺菌有0抗原，耐热，部分菌株有K抗原，能阻止0凝集，无H抗原。0抗原分为型特异性（特异性较高}和群特异性（特异性较低）两类。根据生化反应及O抗原的不同，可将志贺菌分为四个血清群；进一步按型特异性和群特异性O抗原，可将各群志贺菌分为40余种血清型及亚型。我国以B群志贺菌感染最为常见，其次为D群。表志贺菌的分类1.5抵抗力：志贺菌抵抗力较弱，加热至60°C保持10min可杀死。对酸和一般消毒剂敏感。在粪便中，由于其他肠道菌产酸可使志贺菌在数小时

3、内死亡，故在运送标木时应使用含有缓冲液的培养基。1.6变异性：宋内志贺菌最易发生S—R变异，同时伴有生化特征、抗原构造及致病性的变异，而出现非典型菌株。在菌痢恢复期或慢性菌痢患者中常可分离得到非典型菌株。志贺菌属细菌对磺胺类药物、四环素、氨苄西林均表现出耐药性变异。志贺菌的多重耐药己成为-个严重的医学问题。2临床意义2.1致病物质侵袭力：志贺菌借助菌毛黏附于冋肠末端和结肠黏膜上皮细胞，继而穿入上皮细胞内生长繁殖，引起炎症反应。内毒素：志贺菌可产生毒性较强的内毒素，除引起内毒素血症外，还可破坏肠黏膜，形成炎症、溃疡、出血，临床表现为典型的脓血黏液

4、便。内毒素还可作用于肠壁自主神经系统，导致肠功能紊乱、肠蠕动失调、肠道平滑肌痉挛，尤以直肠括约肌最为明显，常出现腹痛、里急后重等症状。外毒素：A群志贺菌能产生志贺毒素，又称Vero毒素。具有神经毒性、细胞毒性、肠毒性，可引起中枢神经系统麻痹、上皮细胞损伤和水样腹泻。2.2所致疾病志贺菌引起的细菌性痢疾.其传染源为患者和带菌者。主要通过粪一U途径传播。人类对志贺菌普遍易感。菌痢在临床上冇四种类型。①急性菌痢：发病急，主要有发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血黏液便等典型临床症状。若治疗及吋，预后良好。②中毒性菌痢：多见于小儿，常无明显的消化道症状而表

5、现为全身中毒症状。如高热、休克、中毒性脑病。病情凶险，病死率高。③慢性菌痢：急性菌痢治疗不彻底或症状不典型被误诊，可转为慢性。病程往往迁延2个月以上。④带菌者：部分患者恢复后可成为带菌者，具有高度传染性，为重要传染源，故菌痢带菌者不能从事餐饮业和幼教等工作。病后免疫主要依赖消化道黏膜表面的SlgA的作用，免疫维持吋间短，也不牢固。3微生物学检验3.1标本采集：尽量在早期（使用抗生素前），采集患者新鲜粪便或脓血黏液便床边接种，否则应将标本保存于30%甘油缓冲盐水或卡一布运送培养基内，并尽快送检。中毒性菌痢患者可取肛门拭子。标本直接检查：以志贺菌抗

6、血清通过乳胶凝集试验、协同凝集试验、免疫荧光菌球法等，可直接检测标本中奋无志贺菌抗原。核酸检测：可利用PCR法检测标本中志贺菌大质粒。3.2分离培养与鉴定3.2.1分离培养：取脓血黏液便或肛门拭子标本接种GN肉汤增菌后，移种肠道选择培养基(SS、EMB/MAC),37°C孵育18〜24h。志贺菌菌落为无色透明或半透明菌落。3.2.2鉴定：可疑菌落若氧化酶试验呈阴性、触酶试验呈阳性，则接种到KIA、MIU培养基上，若反应结果符合数据，则可初步鉴定为志贺菌。志贺菌血清学鉴定：在生化反应符合志贺菌属的特征后，先用志贺菌属A〜D群多价血清(包括A群1〜

7、2型、B群1〜6型、C群1〜6型和D群)做玻片凝集试验。如不凝集，可能为表面K抗原隔离所致，可通过加热到100°C保持15〜30min破坏K抗原，再做凝集试验。如仍不凝集，则可能为EIEC菌株，需进一步鉴别。如发生凝集，再用定群和定型诊断血清做玻片凝集试验以鉴定到群和型。我国以B群多见，若鉴定为B群，需进一步用型因子血清和群因子血清确定其型别及亚型。3.3鉴别要点与肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)鉴别：志贺菌与EIEC菌株血清学反应奋交叉反应，生化反应特征、临床表现很相似。志贺菌分解葡萄糖产酸不产气，动力试验、赖氨酸脱羧酶、醋酸钠及黏质酸盐产酸试

8、验均为阴性，而EIEC均阳性。与类志贺邻单胞菌鉴别：可用氧化酶试验、动力试验加以区别，志贺菌为阴性，而类志贺邻单胞菌为阳性。与伤寒沙门菌鉴别：志贺菌M