沙门菌属和志贺菌属检验

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1、沙门菌属和志贺菌属检验步骤和方法　　1．形态观察　　　(1)革兰染色：沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌。志贺菌属细菌为革兰阴性杆菌，散在分布。　　　(2)观察鞭毛染色标本片：镜下可见沙门菌属细菌具有周鞭毛。志贺菌属细菌无鞭毛。 　　2．菌落观察　　　(1)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35℃孵育18～24h。由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。　　　(2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上

2、经35℃孵育18～24h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。 　　3．生化反应氧化酶试验：方法同大肠埃希菌。沙门菌属和志贺菌属细菌氧化酶试验均为阴性。初步试验鉴定：挑取志贺菌和沙门菌的单个菌落分别接种在KIA、MIU和硝酸盐培养基上，经35℃孵育18～24h，同时做触酶试验。其结果见表2—4。表2-4志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应 KIAMIU氧化酶触酶硝酸盐还原斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶志贺

3、菌KA-/+--+/---++伤寒沙门菌KA-+/-+---++乙型副伤寒菌KA+++---++ 最终鉴定：须做全面生化反应和血清学试验。 　　4．血清学试验　　　(1)志贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合志贺菌属者均需做血清学鉴定。取1环志贺菌四种多价血清于载玻片一端，再取少许待测菌与之混合，同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。结果：对照呈均匀混浊，待检菌与志贺菌四种多价血清混合后，数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。继之用A、B、C、D群最常见的单价血清凝集定种。 　　　结果判断、解释和报告：　

4、　　　①分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到志贺菌属细菌”。　　　　②经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报告“分离出××志贺菌”，若进一步做多种生化反应及因子血清分型后，可报告：“分离出××志贺菌×型”。 　　　(2)沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检查疑为沙门菌，可选用沙门菌的多价诊断血清进行玻片凝集。首先选用A～F组多价“O”诊断血清做玻片凝集试验。在试验时应以生理盐水作对照。血清凝集试验在5～10min内不出现凝集者可确定为阴性。但若生化反应比较典型，应考虑选用Vi凝集试

5、验。若凝集，则用无菌生理盐水将菌洗下，制成浓厚的悬液，加热100℃、30min，再与A～F组多价“O”诊断血清做凝集试验。若与A～F组多价“O”血清发生凝集，应再与沙门菌单价因子血清分别做玻片凝集试验，以确定该菌株属于哪一组。一般先选用本地区检出率最高菌型的相应血清做玻片凝集反应。　　　若已确定哪一沙门菌种后，再分别先用H因子血清检查第I相抗原，然后检查第Ⅱ相抗原，最后确定该菌种属于哪一型沙门菌。 　　　结果判断、解释和报告：　　　　①分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌属细菌鉴定依据者，可报告“未分离出沙

6、门菌”。　　　　②生化反应符合沙门菌、玻片凝集试验结果阳性，可初步报告为：“分离到××沙门菌”，或“×群沙门菌”。 　　5．肥达试验　　　(1)原理：用已知的伤寒沙门菌O、H抗原，甲、乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患者血清做定量试管凝集试验，以出现“2+”凝集的最高血清稀释度为效价，测定相应抗体含量，用以辅助诊断肠热症。　　　(2)试验方法：为单管稀释法。准备4排小试管，每排7支并标记，另取中号试管1支，加生理盐水3．8ml及被检血清O．2ml，混匀，即为1：20稀释，总量为4ml。然后取出2ml

7、按每管0.5m1分别放人各排小试管中的第1支试管中。再于上述中号试管内加生理盐水2ml混匀，此种血清即为1：40稀释，吸取此稀释度血清2ml，按每管0.5m1分别加到各排小试管中的第2支试管中。以此类推连续稀释到各排小试管第6支试管为止，第7支小试管只加入0.5ml生理盐水做阴性对照。然后按表2-5操作。表2-5血清学试验(肥达试验)方法 试验管(每管0.5ml稀释血清)对照管1：201：401：801：1601：3201：640生理盐水O抗原0.50.50.50.50.50.50.5H抗原0.50.50.50.

8、50.50.50.5PA抗原0.50.50.50.50.50.50.5PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最终稀释1：401：801：1601：3201：6401：1280-　　　　　振荡片刻，置于45℃水浴箱中2h或37℃水浴箱4h，取出置室温或放冰箱中过夜，次日观察并记录结果。 　　　(3)结果判断解释和报告：先观察对照管，正确结果应无凝集反应，再分