人牙龈干细胞的分离鉴定及基质细胞衍生因子―1对其趋化效应的研究

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1、人牙龈干细胞的分离鉴定及基质细胞衍生因子一1对其趋化效应的研究［摘要］目的研宄基质细胞衍生因子-1（SDF-1）受体CXCR4在人牙龈干细胞（GMSCs）上的表达及SDF-1对人GMSCs的趋化效应。方法通过有限稀释法分离并培养人GMSCs,检测其表面干细胞标志物的表达情况，测试其克隆形成率及多向分化能力，利用免疫荧光染色法检测人GMSCs上SDF-1受体CXCR4的表达，用Transwell细胞培养室检测不同质量浓度SDF-1对人GMSCs的趋化反应，光镜下计数迁移至滤膜下侧面的不同视野的细胞数。结果人GMSCs具有较高的自我更新能力，在体外

2、呈克隆状生长，表达间充质干细胞表面标志物CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,而造血干细胞表面标志物CD14、CD34和CD45的表达为阴性。体外诱导培养的人GMSCs能够向成骨细胞及成脂细胞分化，其克隆形成率为21.4%±2.8%。免疫荧光染色显示，人GMSCs表达SDF-1受体CXCR4oSDF-l的质量浓度为100、200ng?mL-l时，Transwell细胞培养室中迁移的细胞数目（每高倍视野分别为189.3士4.4和164.6±4.9）显著多于空白对照组（每高倍视野47.8±2.5）（P［关键词］基质细胞衍生因子-1;

3、牙龈干细胞；趋化作用［中图分类号］R78［文献标志码］A［doi］10.7518/hxkq.2015.03.005［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheexpressionofchemokinestromalcell-derivedfactor-1(SDF-1)receptorCXCR4inhumangingivalmesenchymalstemcells(GMSCs)andthemigrationpotentialofGMSCsstimulatedwithSDF-1.MethodsHumanGMSCswerei

4、solatedbysingle-cellcloningmethod.Theircellsurfacemarkerswerecharacterizedbyflowcytometry，andtherateofcolonyformationwasevaluated.DifferentiationassaywasusedtodetectthedifferentiationpotentialofGMSCs.TheexpressionofchemokineSDF-1receptorCXCR4inGMSCswasdetectedbyimmunocytoche

5、micalstaining.Theche-motacticeffectofSDF-1onGMSCswasdetectedusinga24-multiwellTranswellcellculturechamber.Thenumberofnetmigratedcellswascountedindifferentmicroscopefields.ResultsHumanGMSCspossessedhighself-renewalpotentialandformedsingle-cellcoloniesculturedinvitro.GMSCsexpr

6、essedmesenchymalstemcells-associatedmarkersCD44,CD73,CD90,CD105，andCD166,andtheexpressionofhemopoieticstemcellsurfacemarkersCD14，CD34，andCD45wasnegative.GMSCsdifferentiatedintoosteoblastsandadipocytesunderdefinedcultureconditions.Thecolonyformingunit-fibroblasticforGMSCswas2

7、1.4%±2.8%.ImmunocytochemicalstainingdemonstratedthatGMSCsexpressedchemokineSDF-1receptorCXCR4.ThenumberofGMSCsmigratingatconcentrationsof100ng?mL-land200ng?mL-lofSDF-1intheTranswellcellculturechamberwassignificantlyhigherthanthatofthenegativecontrol(189.3±4.4，164.6±4.9cells/

8、fieldvs.47.8±2.5cells/field，P