外周血psa、psa mrna联合检测在前列腺癌诊断中的临

《外周血psa、psa mrna联合检测在前列腺癌诊断中的临》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、外周血PSA、PSAmRNA联合检测在前列腺癌诊断中的临：辛华　马雷　高英英郭宇航　孙玉鸿　江清林　刘国辉【摘要】目的探讨利用外周血PSA、PSAmRNA联合检测诊断前列腺癌（PCa）的临床应用及意义。方法运用酶联免疫分析和巢式RT睵CR检测22例PCa、10例良性前列腺增生（BPH）患者，5例健康男性和5例健康女性外周血中PSA、PSAmRNA的情况。结果　PCa患者血清PSA的水平与临床分期、Gleason评分有关（P＜005），而与年龄无关（P＞005）；外周血PSA、PSAmRNA与临床分期、内分泌治疗有关（P＜005），而与年龄、Gleason评分无关（P＜005）

2、；22例PCa标本中PSAmRNA阳性表达15例，阳性率68%，10例BPH和10例阴性对照标本无表达。结论利用外周血PSA、PSAmRNA联合检测是一种早期发现PCa微转移，判断其临床变化过程、分期、预计复发和评价疗效的方法。【关键词】前列腺特异抗原；前列腺癌；前列腺增生；逆转录聚合酶链式反应　　临床上大约有50%的前列腺癌(PCa)病人在确诊时就已经发生了转移,病变已属晚期，预后不良〔1～3〕。国外报道血清游离PSA与外周血PSAmRNA联合检测PCa在鉴别良、恶疾病上有一定优越性〔4，5〕。国内这方面报道较少。应用RT睵CR技术检测外周血中存在的少量癌细胞，可以发现微转

3、移，对肿瘤的复发、转移、预后及临床治疗具有指导意义〔6，7〕。本研究采用酶联免疫技术和巢式RT睵CR技术联合检测外周血PSA和PSAmRNA，以提高PCa微转移的诊断效率、监测复发、预测肿瘤分期及预后。　　1材料与方法　　11病例资料　　PCa组：选择2005～2006年佳木斯大学附属第一医院、佳木斯市中心医院门诊和住院病人。22例均为初诊PCa患者，均经前列腺穿刺病理诊断，年龄64～82岁，平均72岁。22例PCa患者中有15例接受了内分泌治疗，7例未接受。BPH组：10例均为行前列腺经尿道电切术后病理证实患者，年龄34～81岁，平均65岁。阴性对照组：5例男性健康志愿者（

4、检测前1个月限制性生活）和5例女性健康志愿者，血液学指标均正常，年龄25～45岁，平均38岁。（LetraTgPCR仪：华粤企业集团有限公司；DU800核酸蛋白分析仪：Beckman公司；免疫分析仪器：DNM9602G型酶标分析仪（北京普朗仪器公司）。　　13引物序列　　PCR引物：（1）外引物：PSA494：5’睺ACCCACTGCATCAGGAACA3’；PSA960：5’睠CTTGAAGCACACCATTACA3’。（2）内引物：PSA559：5’睞CACAGGCCAGGTATTTCAG3’；PSA894：5’睪TCCAGCGTCCAGCACACAG3’。β瞐ctin上

5、游：5’睠GGGAAATCGTGCGTGACAT3’；下游：5’睪AACTTTGGGGGATGCTCGC3’。扩增目的片段长度为712bp。　　14血清的提取　　抽取空腹静脉血（各项检查前）5ml，立即2000r/min离心10min，分离血清置-20℃保存，1l静脉血（各项检查前）肝素抗凝，用Ficoll淋巴细胞分离液分离白细胞置-80℃冰箱保存，提取过程按其说明书操作。　　16总RNA的抽提及质量鉴定　　用Trizal试剂提取总RNA，提取过程按其说明书操作。提取产物用12%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA质量。紫外分光光度计下测OD260、OD280，测定RNA纯度和

6、浓度。取OD260/OD280值在18～20范围内的标本进行逆转录。所有实验中的塑料制品及实验用具均经01轕C水处理后高压灭菌。　　17RT睵CR　　取1μg总RNA进行逆转录反应；取逆转录产物2μl和PSA上下游外、内引物各1μl，使用20μl反应体系进行2次PCR（2次PCR反应体系相同），同时扩增PSA、β瞐ctin和阴性对照cDNA（由健康女性外周血白细胞RNA逆转录获得）。具体循环参数为：94℃4min，94℃45s，55℃30s，72℃45s；25个循环之后，72℃延伸10min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后用EB染色，经凝胶成像系统拍照。　　18血清PS

7、A的检测　　PSA定量检测由专人严格按说明书进行操作。　　19统计学处理　　应用SPSS100软件对数据进行处理，采用t检验、χ2检验。　　2结果　　21PCa组、BPH组、阴性对照组血清PSA检测结果见表1。表1PCa组、BPH组、阴性对照组血清PSA的检测结果（略）　　22PCa组血清PSA检测结果与临床参数的关系　　见表2。表2PCa组血清PSA与