氡暴露对大鼠气管

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1、氡暴露对大鼠气管在人类生活环境的天然本底辐射中，由于吸入氡及其子体所产生的辐射剂量约占54%，氡暴露导致的健康危害，已成为近年来的研究热点。大鼠气管-支气管上皮细胞是研究氡暴露生物效应的良好模型，但由于受到染毒装置等条件的限制，过去多进行体外研究。本实验利用多功能移动式氡室对大鼠动态吸入染毒，利用建立的动物模型，采用消化后刷洗法分离得到大鼠气管-支气管上皮细胞〔1〕，观察氡染毒后靶细胞体外发生转化的过程，探讨氡暴露对细胞的损伤效应。　　1材料与方法　　11实验动物处理实验用onth,)和对照组共4组，每组6只动物。染毒时间每天8h，每周6d，染毒期间动物自由活动饮食。　　1

2、2选择性培养基制备选择性F12培养基为Ham’sF12培养基，含有2%胎牛血清，5mg/L胰岛素，03μmol/L氢化可的松。　　13气管-支气管上皮细胞的分离和培养实验组及对照组大鼠气管-支气管上皮细胞的分离和培养采用本实验室建立的消化后刷洗法，见文献〔1〕。　　14细胞集落形成率收集大鼠气管-支气管上皮细胞，制成细胞悬液，以1×105个/60mm培养皿接种于无血清完全F12培养基中37℃5%CO2培养箱中培养，7～8d后计数其形成的细胞集落数，并根据接种的细胞量计算细胞集落形成率(CFE)。一个细胞集落的标准是含有15个细胞以上的细胞团，CFE=细胞集落数/接种的

3、细胞量×100%。　　15细胞存活率根据CFE得出的结果，计算出大鼠气管-支气管上皮细胞存活率。其计算公式为：细胞存活率=氡暴露组细胞集落形成率/对照组细胞集落形成率×100%。　　16转化细胞筛选上述细胞集落计数后，即转入选择性F12培养基对气管-支气管上皮细胞进行筛选。4d换液1次，选择性培养5周，计数转化细胞集落并统计转化率(TF)，TF=转化细胞集落数/进入选择的细胞集落数×100%。　　17转化细胞系的建立大鼠气管-支气管上皮细胞经选择性培养5周后，根据Kitamural〔2〕报道的形态学标准，细胞小而密集的Ⅲ或Ⅳ型集落是具有转化趋向的集落，倒置显微镜下鉴定后

4、，用消毒棉签除去其他的集落细胞，使每皿只含有一个转化集落，继续培养，对Ⅲ或Ⅳ型集落扩增，然后转移到培养瓶中，进行传代培养。　　2结果　　21氡染毒对大鼠气管-支气管上皮细胞转化的影响(表1)随着氡暴露累积剂量的增加，大鼠气管-支气管上皮细胞的集落形成率相应下降(图1，r=-098,P＜0.01)，而转化率则随之增加，呈一定的剂量-反应关系。当暴露量达到90时，无论集落形成率还是转化率，与对照组相比较，差异均有统计学意义，P＜001。　　表1氡暴露对大鼠气管-支气管上皮细胞的转化（略）　　注：与对照组比较，*P＜001　　图1大鼠气管-支气管上皮细胞集落形成率和转化率与

5、氡累积暴露量的关系（略）　　22氡染毒对大鼠气管-支气管上皮细胞存活的影响随着氡暴露累积剂量的增加，大鼠气管-支气管上皮细胞的存活率相应下降，60组为(882±109)%，90组为(715±89)%，120组动物得到的1个转化细胞集落连续传代12代，从120组动物得到的1个转化细胞集落连续传代16代后，这2个细胞系均出现明显衰老现象，并生长缓慢，然后终止传代，分别收集细胞，冷冻保存，用于后续相关研究。　　3讨论　　本实验结果表明，随着氡暴露累积剂量的增加，大鼠气管-支气管上皮细胞的集落形成率和存活率相应下降，并呈一定的剂量-反应关系。表明氡染毒后大鼠气管-支气管上皮

6、细胞出现明显的细胞毒性。本实验中，对早期转化集落中的Ⅲ或Ⅳ型集落扩增后传代培养，得到2个连续传代的非致瘤细胞系，分别传代12和6代。但这2个细胞系因明显的衰老迹象而终止传代，未能进行软琼脂集落形成和裸鼠成瘤实验。细胞转化是细胞建系过程中重要的一步，是建立永生细胞系的基础，可为研究氡致肺癌提供一个直接的途径。细胞转化是少数细胞异常增殖的结果，而这种异常增殖与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关〔3〕。α粒子是否通过影响这两类基因而引起细胞转化甚至恶性转化，有待进一步研究。【