应用荧光pcr技术和细菌培养法检测孕妇产前b族链球菌感染的对比分析

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1、应用荧光PCR技术和细菌培养法检测孕妇产前B族链球菌感染的对比分析刘睿崔坤友刘文彬李珍宇(东莞市清溪医院检验科广东东莞523660)【摘要】目的对比观察荧光PCR技术和细菌培养法用于产前筛查B族链球菌(GBS)感染的检验效果。方法收集500例孕34-37周孕妇阴道肛门拭子，分别进行GBS核酸检测(PCR)及细菌培养检测，对比两种方法的阳性检出率、敏感性、特异性、准确性。结果500例样本屮，PCR技术检测GBS阳性43例，阳性率8.6%,细菌培养法检测GBS阳性26例，阳性率5.2%,差异有显著性(P<0.05)；与测序法对照，PCR技术正确占8

2、9.5%,细菌培养法正确占10.5%,差异有显著性(P<0.05);PCR技术与细菌培养法的敏感性、特异性分别为100%、99.6%和61.0%、99.8%,二者敏感性差异显著(P<0.05)。结论产前B族链球菌检测，PCR技术明显优于细菌培养法，其阳性率高、准确性大、敏感性好，检测速度更快。【关键词】实时荧光PCR细菌培养B族链球菌围产期阳性率敏感性准确性【屮图分类号】R714.14【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)08-0198-02B族链球菌(groupBStreptococci,GBS)是围产期感染的重要病

3、原菌之一，对围产期GBS进行临床筛查尤为必要［1］，我院从2012年起应用PCR技术进行GBS检测。本研究旨在同时进行PCR技术与细菌培养检测，对比观察GBS检测的阳性率、准确性、敏感度。1.材料和方法1.1实验样本收集2012年8月-2013年12月，孕35-37周来院检查的孕妇阴道直肠拭子500例，入选人群无感染性疾病，取样一周前未使用青霉素及艽他抗生素。严格按照取样流程，同吋采集两份标本，分别进行GBS细菌培养和应用PCR技术进行核酸检测，48小时内检测完毕。1.2试剂、方法和仪器1.2.1细菌培养方法：将拭子上的细菌接种于5%羊血培养基中（接

4、种吋菌液在培养皿应尽量均匀地涂开），在37°C培养箱内进行24小吋培养后，由菌落形态、溶血特性、显微镜下所见及生化反成可以确定链球菌，再采用族和型特异性血清进行免疫试验最后确定为GBS。1.2.2PCR方法：采用福建泰普生物科学技术冇限公司B族链球菌核酸检测试剂盒（国食药管械（准）字2001第3400250号），仪器为LC480IIPCR仪（罗氏公司），本院PCR临床实验室经省临检中心验收合格。标本处理:标本登记后4"C冰箱保存,检测前在拭子管中加入清洗缓冲液1ml,高速震荡2min，得到标本悬浮液；13000r/min离心5min，弃上清；再加lm

5、l清洗缓冲液，13000r/min离心5min，弃上清，沉淀用100ul清洗缓冲液重悬，力口入提取固形物，高速震荡5min破碎细胞，95°C干浴2min，立即冰浴5min，13000r/min离心lmin，上清用于扩增。所有开盖操作在B2级生物安全柜中进行。标本检测的其余操作步骤和PCR反应条件按说明书进行。GBS阳性判断标准：FAM荧光信号有明显S形扩增曲线,CT值小于33,TexasRed（内参）CT值小于40,且本批实验阳参、阴参检测结果符合预期。1.2.3测序法作为对照统计两种方法的敏感性、特异性、准确性。PCR法和培养法检测同时阳性或同时阴

6、性则实验通过，如两种方法结果不一致，则扩增后进行测序验证结果。1.3统计学分析统计学处理由SPSS11.0软件包完成，采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学显著性意义。1.结果2.1500例孕妇中，PCR检测检出GBS阳性43例，阳性率8.6%;细菌培养检出GBS阳性26例，阳性率5.2%；两种方法同时阳性25例,同时阴性456例;PCR(+)/培养(-)18例，PCR(-)/培养(+)1例。PCR法与细菌培养法阳性率比较有显著性差异(P<0.05),见表1。2.2将19例荧光PCR法与细菌培养法结果不一致的样本用测序法鉴定后结果：1)

7、PCR(+)/培养(-)的18例标本测序鉴定为B族链球菌序列的为16例，非B族链球菌序列的为2例。2)PCR(-)/培养(+)的1例标本测序鉴定为非B族链球菌序列。荧光PCR法正确占89.5%,细菌培养法正确占10.5%，二者有显著性差异(P<0.05)，见表2。2.3500例样本中PCR与细菌培养检测对照测序法的性能比较，PCR法与细菌培养法检测敏感度有显著性差异(P<0.05),特异性相当，见表3。表1500例样本实时PCR检测与细菌培养阳性率例数(百分比)与细菌培养法比△P&hO.OS)敏感性奋显著差异；★P>0.05,特异性

8、无差异1.讨论GBS为革兰氏阳性球菌，己被证实为围产期母婴感染的主要致病菌之一，在围产医学中具有不可忽视的地