快速、准确的B族链球菌检测——即时荧光探针核酸扩增技术的应用

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1、现代预防医学2013年第40卷第13期ModemPreventiveMedicine，2013，Vo1．40，NO．13·2533··实验技术及其应用·快速、准确的B族链球菌检测-即时荧光探针核酸扩增技术的应用蔡晓沂，钟镐镐，王秀艳，吴秉铨(北京大学医学部病理学系分子病理实验室，北京100191)摘要：目的研究和建立即时荧光探针核酸扩增技术，即荧光PCR检测方法，探讨B族链球菌检测的临床应用和性能。方法首先采用标准化荧光PCR技术和操作流程，进行分析性灵敏性和特异性的鉴定，再收集临床送检样品做进一步认证。结果分析性灵敏性达到lxl0：co

2、pies／ml，分析性特异性达到特定靶序列设计要求，标准B族链球菌检测呈阳性．其他生殖道和直肠部位的易感菌株12株均阴性。并具备高重复性；以B族链球菌培养方法做对比，收集l223例临床样本，实验结果显示：荧光PCR阳性检出率为17．58％，传统培养方法为1O．87％。对PCR(+)培养(一)的72例。再扩增并测序，均检出B族链球菌的特有基因序列。结论荧光PCR检测技术，检测B族链球菌具有较高的灵敏性和特异性．特别有助于孕妇临产前快速检测的应用。关键词：B族链球菌；围产期感染；即使荧光探针核酸扩增检测技术中图分类号：R378．12文献标志码

3、：A文章编号：1003—8507(2013)13—2533—04RapidandaccuratedetectionofgroupBstrepbyreal-timePCRCAIXiao-yi，ZHONGGao-gao，WANGXiu-yan，WUBing—quan．DepartmentofPathology，HealthScienceCenter，PekingUniversity，Bering100191，ChinaAbstract：OBJECTIVETodesignandvalidatereal—timePCRtechniqueforth

4、edetectionofgroupBstreptococcusandtovalidateitsclinicalapplication．METHODSStandardreal—timePCRtechniqueanditsoperationalprocedureweredevelopedforthedetectionofgroupBstreptococcus，followedbyafullscaleevaluationofitsanalyticalsensitivityandspecificity．Clini—calvalidationwas

5、performedbyusingpatients’vaginalfluidspecimens．RESULTSReal—timePCRwithananalyticalsensi-tivityof1xl0copies／mlwaseventuallyreachedinthedetectionofgroupBstreptococcuswith100％anal~icalspecificity．Other12strainsofagnogenitalbacteriawereundetectablebythemethod．Among1223clinica

6、lvaginalfluidsamples，there—al-timePCRdetectionrateofgroupBstreptococcuswas17．58％incontrastto10．87％byconventionalbacterialculture．ThepresenceofspecificDNAsequenceofgroupBstreptococcuswasconfirmedbyreamplificationandsequencinginal172sam—plesthatwerereal-timePCRpositivebutcu

7、lturenegative．CONCLUSIONReal—timePCRisapracticalandreliableassayinthedetectionofgroupBstreptococcuswithhighsensitivityandspecificity．Itisparticularlyusefulforrapidscreeningofwomenbeforedelivery．Theassayshowsahighreliability．Keywords：GroupBstrep；Perinatalinfection；Realtime

8、PCRB族链球菌学名无乳链球菌(S．agalactiae)是一果，患者可在住院后立即得到静脉注射抗生素治疗。种革兰阳性球菌，育龄女性中15％～35％带有生殖道传统的诊断手段是标准细菌培养筛查，