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《快速、准确的B族链球菌检测——即时荧光探针核酸扩增技术的应用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、现代预防医学2013年第40卷第13期ModemPreventiveMedicine,2013,Vo1.40,NO.13·2533··实验技术及其应用·快速、准确的B族链球菌检测-即时荧光探针核酸扩增技术的应用蔡晓沂,钟镐镐,王秀艳,吴秉铨(北京大学医学部病理学系分子病理实验室,北京100191)摘要:目的研究和建立即时荧光探针核酸扩增技术,即荧光PCR检测方法,探讨B族链球菌检测的临床应用和性能。方法首先采用标准化荧光PCR技术和操作流程,进行分析性灵敏性和特异性的鉴定,再收集临床送检样品做进一步认证。结果分析性灵敏性达到lxl0:co
2、pies/ml,分析性特异性达到特定靶序列设计要求,标准B族链球菌检测呈阳性.其他生殖道和直肠部位的易感菌株12株均阴性。并具备高重复性;以B族链球菌培养方法做对比,收集l223例临床样本,实验结果显示:荧光PCR阳性检出率为17.58%,传统培养方法为1O.87%。对PCR(+)培养(一)的72例。再扩增并测序,均检出B族链球菌的特有基因序列。结论荧光PCR检测技术,检测B族链球菌具有较高的灵敏性和特异性.特别有助于孕妇临产前快速检测的应用。关键词:B族链球菌;围产期感染;即使荧光探针核酸扩增检测技术中图分类号:R378.12文献标志码
3、:A文章编号:1003—8507(2013)13—2533—04RapidandaccuratedetectionofgroupBstrepbyreal-timePCRCAIXiao-yi,ZHONGGao-gao,WANGXiu-yan,WUBing—quan.DepartmentofPathology,HealthScienceCenter,PekingUniversity,Bering100191,ChinaAbstract:OBJECTIVETodesignandvalidatereal—timePCRtechniqueforth
4、edetectionofgroupBstreptococcusandtovalidateitsclinicalapplication.METHODSStandardreal—timePCRtechniqueanditsoperationalprocedureweredevelopedforthedetectionofgroupBstreptococcus,followedbyafullscaleevaluationofitsanalyticalsensitivityandspecificity.Clini—calvalidationwas
5、performedbyusingpatients’vaginalfluidspecimens.RESULTSReal—timePCRwithananalyticalsensi-tivityof1xl0copies/mlwaseventuallyreachedinthedetectionofgroupBstreptococcuswith100%anal~icalspecificity.Other12strainsofagnogenitalbacteriawereundetectablebythemethod.Among1223clinica
6、lvaginalfluidsamples,there—al-timePCRdetectionrateofgroupBstreptococcuswas17.58%incontrastto10.87%byconventionalbacterialculture.ThepresenceofspecificDNAsequenceofgroupBstreptococcuswasconfirmedbyreamplificationandsequencinginal172sam—plesthatwerereal-timePCRpositivebutcu
7、lturenegative.CONCLUSIONReal—timePCRisapracticalandreliableassayinthedetectionofgroupBstreptococcuswithhighsensitivityandspecificity.Itisparticularlyusefulforrapidscreeningofwomenbeforedelivery.Theassayshowsahighreliability.Keywords:GroupBstrep;Perinatalinfection;Realtime
8、PCRB族链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiae)是一果,患者可在住院后立即得到静脉注射抗生素治疗。种革兰阳性球菌,育龄女性中15%~35%带有生殖道传统的诊断手段是标准细菌培养筛查,
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