t淋巴细胞斑点试验在结核病诊断中的临床应用

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1、T淋巴细胞斑点试验在结核病诊断中的临床应用杨晓燕岳晨莉(武警陕丙总队医院陕丙丙安710054)【摘要】目的：评价结核酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)快速诊断结核病的临床应用价值。方法：对我院确诊或疑诊结核患者进行T-SPOT.TB检测，检测其诊断结核病的敏感性及特异性。结果：在结核性疾病T-SPOTTB检测灵敏度为90%(36/40)，特异度为91.2%(31/34)。肺结核组T-SPOT.TB检测灵敏度为92.8%(26/28)，结核性胸膜炎组，检测灵敏度为83%(10/12)o结论：T

2、-Spot.TB试验是检测诊断结核的快速敏感方法，在结核性疾病诊断中有重要价值。【关键词】酶联免疫斑点试验结核病灵敏度特异度【中图分类号】R52【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)15-0214-02肺结核是危及人类健康的传染病之一，传统的结核菌素皮试及结核菌素纯蛋白衍生物作为结核感染诊断技术，其敏感性及特异性较差。发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术十分重要。酶联免疫斑点(enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT)技术是一种新型的免疫酶技

3、术，从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞。由EUSPOT发展而来的结核感染T细胞斑点试验技术(T-SPOT.TB)，使用结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PB-MC),通过细胞因子γ干扰素(IFN-γ｝的分泌检测抗原特异性T淋巴细胞的段答反成，从而判断结核感染状态，具有较高的敏感性和特异性［1-2］。木文就T-SPOT.TB检测对结核性疾病的诊断价值进行初步探讨，为结核病的早期诊断及疗效判

4、断提供一项快捷、灵敏的指标。1资料与方法1.1一般资料对2010年1月至2012年10月我院呼吸内科疑诊或待排结核患者在其他详细检查基础上同时行T-SPOT.TB检测。其中结核组40例，年龄在22-76岁，其中肺结核28例，结核性胸膜炎12例。结核性疾病组34例，其中健康体键者10例，余24例为排除结核的呼吸道感染病人。根据以下标准分组［3】，(1)确诊结核组，包括肯定结核性疾病:结核杆菌培养阳性(金标准)；很可能结核性疾病:结核杆菌培养阴性；但临床表现、影像学或病理学检查支持结核,且抗结核治疗

5、有效;(2)非结核性疾病:临床表现明确系其他疾病所致，或者经苏他治疗病情改善。1.2方法T-SPOT.TB试验:采用上海复星科技有限公司提供的试剂盒。基本步骤如下:取枸橼酸钠抗凝静脉血5ml,分离PBMC放在包被INF-γ抗体的微孔板，加入结核特异性抗原早期分泌靶向抗(ESAT-6)和培养滤过蛋白(CFP-10)作为刺激原，温箱培养24h后，洗去抗原致敏效应T淋巴细胞，加入生物素标记的二抗，再经酶联显色，在细胞因子分泌的地方形成斑点，通过记录斑点数检测结核特异抗原致敏的效应T淋巴细胞

6、数量。结果判断:当空白对照孔内斑点数<6吋，任一实验孔斑点数减去空白孔斑点数≥6,结果即为阳性;若空白对照孔斑点数>6,任一实验孔斑点数大于空白孔斑点数的两倍，结果也表示阳性。2结果确诊结核组病例40例，检测结果阳性36例，检测灵敏度为90%(36/40)。正常对照组:共检测34例，检测结果阳性3例，阴性31例，特异度为91%(26/32)。T-Spot.TB试验结果分布见表1。表1结核组与非肺结核组T-SPOT阳性检出情况比较3讨论近年来T-SPOT.TB在肺结核诊断和疗效观

7、察中的应用已取得了进展。通过本研究发现，确诊结核组病例40例，检测结果阳性36例，检测灵敏度为90%(36/40)。正常对照组共检测34例，检测结果阳性3例，阴性31例，特异度为91%(26/32)。而对于肺结核组及结核性胸膜炎组，T-SPOT.TB检测灵敏度分别为92.8%(26/28及83%(10/12)。因此T-SPOT.TB判断是否感染结核与临床证实的活动性肺结核相符，应用其作为判定菌阴肺结核活动性可获得较为满意的敏感度。同吋T-SPOT.TB对于结核性胸膜炎胸腔积液的诊断，也有一定的价

8、值。综合以上分析和国内外的一些研究[4】,T-Spot.TB技术作为一种新的检测结核感染的免疫学方法，它提高了结核检测阳性率，可作为结核病早期诊断的一项辅助检查手段[5],可用于临床症状不典型、PPD诊断不明确和痰涂片培养均为阴性的疑似结核患者，此检査方法具冇较高的灵敏度和特异度。参考文献[1]AI2ZamelFA.DetectionanddiagnosisofMycobacteriumtuberculosis.ExpertRevAntiinfectTher,2009,7(9):1099-110