糖蛋白a34在胃癌演变过程中表达的变化

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1、糖蛋白A34在胃癌演变过程中表达的变化【摘要】目的：探讨糖蛋白A34在胃癌演变过程中的表达情况及临床意义。方法：采用RTPCR方法分别检测18例正常胃黏膜（A组）、30例慢性萎缩性胃炎胃黏膜（B组）、24例早期胃癌黏膜组织（C组）及48例进展期胃癌黏膜组织（D组）中糖蛋白A34mRNA的表达情况。免疫组化法检测各组糖蛋白A34的表达情况。结果：糖蛋白A34mRNA在正常组织、萎缩性胃炎组织、早期胃癌组织和进展期胃癌组织中相对表达水平分别为0.093±0.010,0.211±0.023,0.258±0.017,0.259±0.021,糖蛋白A34在各组表达阳性率

2、分别为5.56%,33.33%,70.83%,75.00%。糖蛋白A34及其mRNA的表达在A，B，C三组之间差异均具有统计学意义(P<0.05)，早期胃癌和进展期胃癌两组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：糖蛋白A34在胃癌的演变过程中的表达逐渐加强。【关键词】胃癌；糖蛋白A34；逆转录聚合酶链反应；免疫组化［Abstract］Objective:ToinvestigatetheexpressionofglycoproteinA34inthedevelopmentofgastriccarcinomaanddiscusstheirrelations

3、RNAandproteinmunohistochemicaltechniquein18healthyvolunteers(groupA),30patientsa(groupC)，and48patientsa(groupD).Results：TheexpressionofglycoproteinA34mRNAal,chronicatrophicgastritis,earlygastriccarcinomaandadvancedgastriccarcinomarespectively.ThepositiverateofglycoproteinA34onggroupA

4、,BandC(P<0.05)andnostatisticaldifferencebeta；glycoproteinA34；RTPCR；immunohistochemistry胃癌(gastriccarcinoma)是我国最常见的恶性肿瘤之一，其预后与诊断时的临床分期密切相关。胃癌的形成是一个多阶段、多步骤的复杂过程。胃癌前期病变与胃癌的发生关系，日益受到人们的重视。近几年来国内外学者正深入到胃癌及其癌前病变的分子生物学领域，以寻找特异性指标，作为早期或超早期诊断的手段［13］。糖蛋白A34（glycoproteinA34，GPA34）是最近发现的一种具

5、有较高组织专一性的细胞表面蛋白，在正常组织中的表达仅限于胃和睾丸［4］，但其在胃癌演变过程的变化尚未被发现，本研究旨在观察GPA34在胃癌演变过程中的表达变化。1材料与方法1.1标本选用我院胃镜室2007年9月～2008年3月间胃镜下活检标本共48例,包括正常胃黏膜组织18例（A组）和慢性萎缩性胃炎患者的胃黏膜组织30例（B组），我院普外科2007年9月～2008年3月间手术的胃癌患者癌组织72例，其中早期胃癌黏膜组织24例（C组）及进展期胃癌黏膜组织48例（D组），所有病例均经病理确诊。所有病例均未接受抗肿瘤治疗。新鲜组织离体后迅速放入液氮中保存备用。1.2R

6、TPCR1.2.1组织标本总RNA的提取严格按照TrizolReagent试剂盒说明书提取组织总RNA,核酸蛋白检测仪测定所提取标本RNA的浓度和纯度，并计算其含量。1.2.2逆转录RTPCR试剂盒购于TaKaRa大连宝生物公司，其余试剂均购自天根生化科技有限公司。取每份标本的总RNA2μg进行逆转录反应，反应体系共20μl：MgCl24μl，10×RT缓冲液2μl，去RNA酶dH2O7.5μl，dNTP混合物（各10mmol/L）2μl，RNA酶抑制剂0.5μl，AMV反转录酶1μl，Random9mers1μl，RNA2μl。混匀后按以下条件进行逆转录反

7、应：30℃10min，42℃30min，99℃5min，5℃5min。终止反应，将逆转录终产物cDNA以1∶4稀释后置-20℃保存备用。1.2.3聚合酶链反应根据基因库提供的GPA34的mRNA序列，应用Primer5.0设计引物。PCR反应条件：95℃5min，95℃30s，57.9℃30s，72℃1min，30个循环,72℃5min。序列见表1。表1RTPCR引物序列1.2.4结果判定取10μl上述PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定，电泳成像拍照并用KodakD3.5专用软件进行图像分析。将目的条带的积光光密度与内参照GAPDH条带积光光密度比值作为产物的

8、相对表达量。对每1份标本