p糖蛋白在乳腺癌原发性耐药过程中的表达

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1、P糖蛋白在乳腺癌原发性耐药过程中的表达作者：赵菲，姜军，范林军，杨新华，张毅【关键词】基因PglycoprotEinexpressioninthedevelopmentofprimarymultidrugresistanceinbreastcarcinoma　　【Abstract】AIM:TostudytheexpressionandsignificanceofPglycoprotEIn(Pgp)inthedevelopmentofmultidrugresistanceinbreastcancer.METHODS:Thee

2、xpressionofPgpandMDR1mRNAmunohistochemistryandreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)inthespecimensfrom25breastcancerpatientsotherapy(NACgroup),15breastcancerpatientsotherapy(nonNACgroup)and10patientsRNAexpressionetumorcellstolerancestochemotherapeutics

3、increaseduringtheprocessofoncogenesisandthetolerancescanbeinducedbyanextremelyloultidrugresistanceinbreastcarcinoma.　　【Keys　　【摘要】　目的：　研究乳腺癌原发性耐药过程中P糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp）的表达特征，初步探讨乳腺癌原发性耐药的发生机制.方法：采用免疫组织化学及逆转录多聚酶链反应技术，对25例接受术前新辅助化疗的乳腺癌患者、15例未接受术前化疗的乳腺癌患者、10例乳腺腺病患者

4、组织标本内Pgp和MDR1mRNA的表达情况进行检测.结果：Pgp表达阳性率在乳腺癌术前化疗组患者和未化疗组患者中分别为84.0%（21/25）和46.7%（7/15），对照组未见Pgp表达；MDR1表达阳性率在三组则分别为84.0%（21/25）、53.3%（8/15）和10%（1/10），组间差异均显著（P＜0.01）.结论：　部分乳腺癌细胞在恶性变的过程中同时伴有对化疗药物耐受能力的增加，肿瘤细胞内极低水平的MDR1mRNA表达即可导致多药耐药，MDR1/Pgp与乳腺癌的内源性耐药相关.　　【关键词】　P糖蛋白；基因

5、，MDR；乳腺肿瘤　　0引言　　多药耐药（multidrugresistance,MDR）是肿瘤治疗失败的重要原因.目前对MDR的研究主要集中于肿瘤细胞在化疗药物诱导下所产生的获得性耐药，对内源性耐药机制的研究则尚欠深入.而在临床治疗中，若预先了解肿瘤细胞的内源性耐药状况，不仅可以避免因使用MDR型药物而导致的获得性多药耐药，而且可以针对肿瘤的耐药特点使用逆转剂，提高化疗效果.我们通过免疫组化方法及RTPCR法检测P糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp）及其编码基因MDR1（multidrugresistance1）

6、在乳腺癌原发性耐药过程中的表达.　　1材料和方法　　1.1材料　　200302/200310住院女性乳腺癌患者接受术前化疗者25例（术前化疗组），未行术前化疗者15例（术前未化疗组），乳腺腺病手术患者10例（对照组）.3组患者年龄无显著差异，组间均衡性好.取材后标本直接置于液氮中冻存备用.采用福州迈新生物技术开发公司的免疫组化染色试剂盒与即用型抗PgpmAb.　　1.2方法　　按说明书进行.Pgp以胞质和胞膜呈棕黄色着色为阳性，染色强度与阳性细胞的百分比乘积>3分为免疫反应（+）.　　采用Roche公司的Tripur

7、e试剂提取组织总RNA.获得的RNA行琼脂糖凝胶电泳见清晰的28S,18SrRNA条带；紫外分光光度仪测定其260nm及280nm的A值比值>1.65，证实样本无污染.RNA浓度=A260×37×500mg/L.RTPCR采用两步法，逆转录反应体系：5×缓冲液5.0μL，10mmol/LdNTP1.25μL，40MU/LRnasin0.625μL，200MU/LMMlV逆转录酶1.0μL，加DEPC去离子水至总体积25μL，PCR仪上42℃逆转录60min,99℃5min灭活逆转录酶；PCR反应体系：逆转录产物10μ

8、L，10×缓冲液5.0μL，25mmol/LMgCl28μL，2.5mmol/LdNTP4μL，5MU/LTaq酶0.25μL，20μmol/L上下游引物各0.5μL，并设βactin为内参，加DEPC去离子水至总体积50μL.引物序列如下：MDR1：上游5′GTTGCCATTGACTGAAAGAAC3