酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系

酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系

ID:23963219

大小:53.50 KB

页数:4页

时间:2018-11-12

酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系  _第1页
酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系  _第2页
酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系  _第3页
酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系  _第4页
资源描述:

《酪氨酸激酶etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系 》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、酪氨酸激酶Etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系苏珊张健郭琳琅朱伟良张振华【摘要】  目的:观察酪氨酸激酶Etk的表达与放射引起的鼻咽癌细胞株凋亡之间的关系,探讨Etk对放射引起的鼻咽癌细胞凋亡的调节机制.方法:运用免疫荧光技术和流式细胞术检测4株鼻咽癌细胞Etk的表达情况;直线加速器6MVX射线2Gy单次剂量照射细胞后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,以及与Etk,凋亡相关蛋白Bcl2及Bak表达的关系.结果:流式细胞仪检测显示4株鼻咽癌细胞Etk表达水平分别为:58F(73.3±3.4)%,610B(50.5±6.1)%,E1(47.7±1.9)%,E2(2

2、9.5±1.7)%.免疫荧光显示,Etk蛋白主要在鼻咽癌细胞胞质中表达,胞核中表达微弱.统计分析表明,放射线照射后,鼻咽癌细胞株Etk的表达降低,并与细胞的凋亡率及Bak蛋白的表达呈负相关,与Bcl2的表达无关.结论:Etk蛋白与放射引起的鼻咽癌细胞凋亡有关,它可能通过调节凋亡蛋白Bak的表达参与了放射后鼻咽癌细胞的凋亡.【关键词】鼻咽肿瘤蛋白质酪氨酸激酶Etk细胞凋亡0引言内皮/上皮细胞酪氨酸激酶(Theendothelial/epithelialtyrosinekinase,Etk),是蛋白酪氨酸激酶(Brutonstyrosinekinase,Btk)家族中惟一一种

3、不仅分布于淋巴造血细胞,还在上皮性瘤细胞和血管内皮细胞中表达的非受体类酪氨酸激酶〔1〕.国外研究表明,Etk与T,B淋巴细胞的增殖、分化关系密切,并对乳腺癌、前列腺癌等癌细胞的增殖和凋亡起重要的调节作用〔2-3〕.我们最近报道,在鼻咽癌组织中也存在Etk的异常表达,并与EBER1(EBVEncodedRNA)的表达相关,而与凋亡相关蛋白Bcl2的表达无关〔4〕.本研究我们利用直线加速器对鼻咽癌细胞进行照射,用流式细胞仪检测照射前后细胞的凋亡率及Etk,Bcl2和Bak的表达,探讨Etk与放射后鼻咽癌细胞凋亡之间的关系及其可能调节机制.1材料和方法1.1材料兔抗人Etk多

4、克隆抗体购自美国CellSingnaling公司;FITC标记羊抗兔IgG购自美国CHEMICON公司;兔抗人Bak多克隆抗体及兔抗人Bcl2多克隆抗体购自福州迈新生物技术公司;AnnexinVFITC凋亡试剂盒购自美国BeckmanCoulter公司;RMPI1640培养液购自美国GIBCO公司;新生牛血清购自奥地利PAA公司.细胞株:高成瘤、高转移的低分化鳞癌细胞株58F及低成瘤、不转移的低分化鳞癌细胞株610B由南方医科大学病理学研究室馈赠,高分化细胞株E1,低分化细胞株E2由中山医科大学病理学研究室馈赠.1.2方法1.2.1细胞培养加入含150mL/L灭活

5、新生牛血清的RMPI1640培养液,置于37.5℃,饱和湿度50mL/L的CO2培养箱中培养.收集融合率70%~80%,存活细胞百分率>95%的对数生长期细胞以备实验.1.2.2免疫荧光技术鼻咽癌细胞在预处理过的盖玻片上培养24h至70%~80%细胞融合,PBS洗涤3次,丙酮冰上固定15min,洗涤3次后加入兔抗人Etk多抗(稀释浓度1∶100),37℃温育2h,洗涤后加入FITC标记羊抗兔IgG抗体(稀释浓度1∶50),37℃温育1h,PBS洗涤后封片,于荧光显微镜下观察.1.2.3直线加速器照射产地:美国Varian公司,6MVX射线,剂量2Gy,剂量率4Gy/m

6、in,照射野15cm×30cm.1.2.4流式细胞仪分析①鼻咽癌细胞株照射前后Etk的表达:分别收集照射前与照射后6,12h的鼻咽癌细胞,50g/L多聚甲醛固定15min,PBS洗涤后,破膜剂裂解细胞,加入兔抗人Etk多抗(稀释浓度1∶100),孵育1h,再次洗涤离心,加入FITC标记羊抗兔IgG抗体(稀释浓度1∶50),孵育0.5h后,在流式细胞仪上检测Etk蛋白的表达,出现绿色荧光的细胞为Etk蛋白表达阳性.②采用上述相同的方法,检测放射线照射前后细胞Bcl2,Bak蛋白的表达水平.③照射后鼻咽癌细胞的凋亡率:收集照射后12h的鼻咽癌细胞,PBS洗涤离心后,1×bind

7、ingbuffer(结合缓冲液)调整细胞浓度为5×109/L,取100μL与5μLFITC及2.5μLPI溶液混匀,冰上避光孵育10min,加入400μL1×bindingbuffer混匀后,应用美国BectonDickson公司的FACSort型流式细胞仪进行分析.统计学处理:数据采用统计软件SPSS10.0,结果用x±s表示,差异比较采用t检验,并进行Spearman相关分析.2结果2.1流式细胞仪检测照射前4株鼻咽癌细胞Etk表达的阳性率,从高到低依次为:58F(73.3±3.4)%,610

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。