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时间:2018-11-11
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1、核因子κB在胰腺癌中的表达及与VEGF和p53表达的相关性【摘要】目的探讨核因子κB(NFκB,p65)在胰腺癌组织中的表达及其与VEGF、p53蛋白表达的相互关系。方法电泳迁移率变动分析(EMSA)测定45例胰腺癌及癌旁组织、8例慢性胰腺炎和9例正常胰腺组织中NFκB的活性,分期(1997恶性肿瘤国际临床病期分类)标准:Ⅰ期11例、Ⅱ期9例、Ⅲ期13例、Ⅳ期12例;伴有区域或远处淋巴结转移和周围浸润者30例,其中远处转移者18例(肝转移、腹膜和网膜种植等)无淋巴结转移和周围浸润者15例。8例慢性胰腺炎和9例正
2、常胰腺组织新鲜标本,取自壶腹癌和胰腺内分泌肿瘤的病人。所有标本在术后立即放入-70℃冰箱备用,所有病人均为第一次手术,术前未经任何放化疗。1.2主要试剂鼠抗人p65单抗、鼠抗人IκBa多抗、鼠抗人p53单抗(突变型)、鼠抗人VEGF单抗,免疫组化染色(SP)试剂盒均购自北京中山生物技术公司,γ32ATP标记的双链寡核苷酸探针:5、AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC33、TCAACTCCCCTGAAAGGGTCCG51.3方法1.3.1Westernblot分析提取细胞核蛋白[1],采用Loa
3、n相关分析。2结果2.1Western检测NFκB、IκBa的表达p65在肿瘤组织的灰度值高于癌旁组织,IκBa在肿瘤组织的灰度值低于癌旁组织,(正常胰腺和慢性胰腺炎组织偶见表达),说明肿瘤组织中p65激活,而IκBa失活见图1、表1。1:肿瘤组织;2:肿瘤旁组织;3:正常胰腺组织;4:慢性胰腺炎组织图1SA检测NFκB的活性胰腺癌组织中可见明显的条带,癌旁组织少量条带,慢性胰腺炎和正常胰腺组织未见条带,提示肿瘤组织NFκB结合活性提高,见图2。2.3免疫组化法检测VEGF、p53、p65蛋白表达p65
4、在肿瘤组织的检出率71%(32/45),高于癌旁组织20%(9/45),P<0.01;p53、VEGF在胰腺癌组织中的阳性表达分别为57.8%(26/45)、64.4%(29/45),分别高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),VEGF阳性染色位于细胞质,阳性细胞分布在血管周围,见图3。1:正常胰腺组织;2:慢性胰腺炎组织;3:肿瘤旁组织;4:肿瘤组织图2NFκB在不同组织中的活性检测2.4胰腺癌的临床病理特征与p65蛋白表达的关系p65蛋白表达与胰腺癌的分化程度、临床分期,肿瘤大小无关(P&
5、gt;0.05);但p65蛋白在浸润转移组的表达率高于非浸润转移组(P<0.01),远处转移组高于非远处转移组(P<0.05),见表1。表1胰腺癌的临床病理特征与p65蛋白表达2.5胰腺癌组织p65蛋白表达与VEGF、p53蛋白表达的相关性分析VEGF在浸润转移组和远处淋巴结转移组的阳性表达率分别为70%(21/30)和88.9%(16/18);p53在浸润转移组和远处转移组的阳性表达率分别为66.7%(20/30)和83.33%(15/18)。在浸润转移和远处淋巴结转移组中的VEGF阳性表达组中,VE
6、GF和p53的阳性表达符合率为61.9%(13/21)和75.0%(12/16)。30例浸润和淋巴结转移组胰腺癌组织中,p65阳性表达27例,VEGF在这27例中阳性表达19例,两者符合率为70.4%(19/27)。但在17例p65阳性表达的远处转移组中,VEGF阳性表达14例,两者符合率为82.4%(14/17)。同样,在转移组和远处转移组中,p53和p65的表达符合率分别为59.3%(16/27)和82.4%(14/17)。3讨论核因子κB(NFκB、p50/p65)是近年来发现的一种转录因子,其表达水平与某
7、些肿瘤的浸润、粘附、转移行为密切相关。近年来发现,核因子κB引起肿瘤细胞浸润、粘附、转移的原因是由于核因子κB激活后导致许多粘附分子、血管生长因子、基质蛋白酶的瀑布样释放。我们发现[4,5],核因子κB在肝癌中高表达,并且表达越高,转移率越高;细胞系研究揭示[6],核因子κB与肝癌转移的关系通过MMP9实现;前列腺癌和膀胱癌的研究中发现[7,8],核因子κB与肿瘤转移的关系分别通过MMP9、VEGF和IL8实现;胰腺癌细胞系研究提示[9],核因子κB与胰腺癌细胞转移行为有关,VEGF、IL8参与了这个过程。
8、本研究发现,胰腺癌组织中NFKB被活化,p65蛋白在癌组织表达明显增高,表明NFκB激活在胰腺癌的发生发展中有重要作用。本研究还发现,p65蛋白表达与胰腺癌的分化程度、临床分期、肿瘤大小无关,但与与肿瘤周围浸润和淋巴结转移有关:p65蛋白表达在浸润和淋巴结转移组高于非浸润和转移组,远处转移组高于非远处转移组,说明核因子κB参与了胰腺癌的浸润转移过程。VE
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