核因子κb在胰腺癌中的表达及与vegf和p53表

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1、核因子κB在胰腺癌中的表达及与VEGF和p53表【摘要】目的探讨核因子κB(NFκB,p65)在胰腺癌组织中的表达及其与VEGF、p53蛋白表达的相互关系。方法电泳迁移率变动分析(EMSA)测定45例胰腺癌及癌旁组织、8例慢性胰腺炎和9例正常胰腺组织中NFκB的活性,分期（1997恶性肿瘤国际临床病期分类）标准：Ⅰ期11例、Ⅱ期9例、Ⅲ期13例、Ⅳ期12例；伴有区域或远处淋巴结转移和周围浸润者30例，其中远处转移者18例（肝转移、腹膜和网膜种植等）无淋巴结转移和周围浸润者15例。8例慢性胰腺炎和9例正常胰腺组织新鲜

2、标本，取自壶腹癌和胰腺内分泌肿瘤的病人。所有标本在术后立即放入-70℃冰箱备用，所有病人均为第一次手术,术前未经任何放化疗。1.2主要试剂鼠抗人p65单抗、鼠抗人IκBa多抗、鼠抗人p53单抗（突变型）、鼠抗人VEGF单抗，免疫组化染色（SP）试剂盒均购自北京中山生物技术公司，γ32ATP标记的双链寡核苷酸探针：5、AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC33、TCAACTCCCCTGAAAGGGTCCG51.3方法1.3.1SA检测NFκB的活性胰腺癌组织中可见明显的条带,癌旁组织少量条带，慢性胰腺

3、炎和正常胰腺组织未见条带，提示肿瘤组织NFκB结合活性提高，见图2。2.3免疫组化法检测VEGF、p53、p65蛋白表达p65在肿瘤组织的检出率71%(32/45),高于癌旁组织20%(9/45），P<0.01；p53、VEGF在胰腺癌组织中的阳性表达分别为57.8%（26/45）、64.4%（29/45），分别高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05），VEGF阳性染色位于细胞质，阳性细胞分布在血管周围，见图3。1：正常胰腺组织；2：慢性胰腺炎组织；3：肿瘤旁组织；4：肿瘤组织图2NFκB在不同组

4、织中的活性检测2.4胰腺癌的临床病理特征与p65蛋白表达的关系p65蛋白表达与胰腺癌的分化程度、临床分期，肿瘤大小无关(P>0.05)；但p65蛋白在浸润转移组的表达率高于非浸润转移组（P<0.01），远处转移组高于非远处转移组（P<0.05），见表1。表1胰腺癌的临床病理特征与p65蛋白表达2.5胰腺癌组织p65蛋白表达与VEGF、p53蛋白表达的相关性分析VEGF在浸润转移组和远处淋巴结转移组的阳性表达率分别为70%（21/30）和88.9%(16/18);p53在浸润转移组和远处转移组的阳性表达

5、率分别为66.7%（20/30）和83.33%(15/18)。在浸润转移和远处淋巴结转移组中的VEGF阳性表达组中，VEGF和p53的阳性表达符合率为61.9%（13/21）和75.0%（12/16）。30例浸润和淋巴结转移组胰腺癌组织中，p65阳性表达27例，VEGF在这27例中阳性表达19例，两者符合率为70.4%（19/27）。但在17例p65阳性表达的远处转移组中，VEGF阳性表达14例，两者符合率为82.4%（14/17）。同样，在转移组和远处转移组中，p53和p65的表达符合率分别为59.3%（16/27）

6、和82.4%（14/17）。3讨论核因子κB（NFκB、p50/p65）是近年来发现的一种转录因子，其表达水平与某些肿瘤的浸润、粘附、转移行为密切相关。近年来发现，核因子κB引起肿瘤细胞浸润、粘附、转移的原因是由于核因子κB激活后导致许多粘附分子、血管生长因子、基质蛋白酶的瀑布样释放。我们发现[4,5]，核因子κB在肝癌中高表达，并且表达越高，转移率越高；细胞系研究揭示[6]，核因子κB与肝癌转移的关系通过MMP9实现；前列腺癌和膀胱癌的研究中发现[7,8]，核因子κB与肿瘤转移的关系分别通过MMP9、VEGF和

7、IL8实现；胰腺癌细胞系研究提示[9]，核因子κB与胰腺癌细胞转移行为有关，VEGF、IL8参与了这个过程。本研究发现，胰腺癌组织中NFKB被活化，p65蛋白在癌组织表达明显增高，表明NFκB激活在胰腺癌的发生发展中有重要作用。本研究还发现，p65蛋白表达与胰腺癌的分化程度、临床分期、肿瘤大小无关，但与与肿瘤周围浸润和淋巴结转移有关：p65蛋白表达在浸润和淋巴结转移组高于非浸润和转移组，远处转移组高于非远处转移组，说明核因子κB参与了胰腺癌的浸润转移过程。VEGF是最重要的促进血管生成的因子。有研究发现[10,

8、11]，胰腺癌细胞VEGF基因的表达受NFκB基因调控，因为NFκB激活或阻滞后，VEGF表达和血管生成发生变化，肿瘤细胞的转移能力发生改变，肺癌细胞系的研究也得到了相同的结果[12]。在本试验中，VEGF在胰腺癌组织中高表达，且VEGF表达水平与胰腺癌淋巴结转移和远处转移有关，VEGF基因表达的改变可能与上述机理有关。VEG