胃癌IκBα与核因子κB表达的研究

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1、胃癌IκBα与核因子κB表达的研究【摘要】目的：研究IκBα与核因子κB(NF_κB)在胃癌组织中的表达，了解细胞内IκBα水平的变化对NF_κB活性的影响。方法：62例胃癌患者术后切取胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织，用免疫印迹法对胃癌组织及正常胃黏膜组织中IκBα与NF_κB表达进行配对研究。结果：59例胃癌组织中细胞浆IκBα水平表达下降，伴随细胞核NF_κB活性增强(P【关键词】胃癌IκBα核因子κB［Abstract］Objective:TostudytheexpressionofinhibitorkappaBα(IκBα)andnuclearfactorkappaB(NF_κB

2、)ingastriccarcinomatissuesandtheinfluenceofIκBαlevelontheactivityofNF_κB.Methods:WesternblotwasusedtoexaminetheexpressionofIκBαandNF_κBingastriccarcinomatissuesandadjacentnormalgastricmucosaltissues.Theresultswereanalyzedbycomparingstudy.Results:Analyzedbycomparingstudy,incases,thelevelofIκBαinc

3、ytoplasmdecreasedandtheNF_κBexpressioninnucleoplasmincreased,howeverincasestherewasnosignificantdifference.Conclusion:ThedegradationofIκBαincytoplasmisessentialfortheaberrantactivationofNF_κB.［KeyWords］gastriccarcinoma;inhibitorkappaBα;nuclearfactorkappaB核因子κB(NF_κB)可以和位于基因的启动子或增强子中相应的具有5′GGGRNN

4、YYCC3′的κB序列位点结合，主要对基因的转录起促进作用，参与诸如免疫、生长发育、细胞成熟和凋亡等人体生理调节过程，与肿瘤发生关系密切［1］。IκBα是一种抑制性蛋白质，主要停留于细胞浆中。IκBα属于IκBs家族成员之一［2］。IκBs家族成员都含有6～7个锚蛋白重复序列，可以和NF_κB结合，阻止其向细胞核转移。当IκBα磷酸化后被水解释放出NF_κB才具有转录调节作用，但NF_κB活化并不一定需要IκBα降解［3］。本研究试图通过分析胃癌及其癌旁正常胃黏膜组织中细胞核内NF_κB和细胞浆中IκBα水平，以了解胃癌中NF_κB活化情况和细胞浆中IκBα水平的变化对NF_κB活化的

5、影响。1资料与方法11研究对象XX_12～XX_10来自粤东地区的62例胃癌患者(无化疗史。男性35例，女性27例。年龄47～81岁，平均72岁)在我院行胃癌根治术。标本离体后30?min内分别于癌肿本身和距癌肿边缘5?cm以上的正常组织取材，NS清洗后，组织装入冰盒中转运至_80?℃冰箱保存。12主要试剂小鼠抗NF_κBp65单克隆抗体，IκBα多克隆抗体(SantaCruz公司，美国)；Leupeptin，Pepstatin，Aprotinin(Amresco公司，美国)；NC膜(Millipore公司，美国。孔径05?mm)；pv_6000通用二抗试剂盒(北京中杉金桥生物技

6、术有限公司，中国)；ECLKit(SantaCruz公司，美国)。13方法131蛋白提取和保存新鲜胃黏膜组织置入预冷细胞浆裂解液中，迅速在低温环境中匀浆，匀浆后冰上静置10?min，然后加入体积分数10%的NP_40，混匀后4?℃下离心，小心吸取细胞浆蛋白，并保留备用。离心后的沉淀中添加细胞核裂解液，混匀后冰上静置30?min，4?℃再次离心，小心吸取细胞核蛋白，并保留备用。测定细胞浆和细胞核蛋白浓度后将提取物超低温保存。132Westernblot质量分数10%的PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳。每个泳道上样40?μg，电泳后转膜，将NC膜放置于质量分数5%的脱脂奶溶液中于4?℃

7、冰箱封闭过夜，然后添加NF_κBp65一抗(1∶1?000稀释)室温孵育15?h，TBST漂洗3次后，加通用型IgG_HRP多聚体二抗室温孵育20?min，增强化学发光试剂处理，胶片曝光显影。14统计学处理使用QuantityOne软件分析蛋白条带密度，并以第2期蒲泽锦等.结果1细胞浆中IκBα表达59例胃癌患者体内癌细胞浆IκBα表达水平低于正常胃黏膜细胞，3例体内癌细胞浆IκBα水平与正常胃黏膜细胞无统计学意义(图1)。本组胃癌和正常