脑益康药物血清对d半乳糖致海马神经元凋亡的影响

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1、脑益康药物血清对D半乳糖致海马神经元凋亡的影响作者：朱燕周爱玲胡亚娥茅家慧施海燕【摘要】　　目的观察脑益康对D半乳糖诱导海马神经元凋亡的影响。方法制备脑益康药物血清。应用D半乳糖诱导海马神经元损伤，测定细胞存活率及细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活力和丙二醛（MDA）含量，检测海马神经元Bcl2mRNA的表达。结果脑益康药物血清可显著提高细胞存活率和SOD及GSHPx活力（均P＜0.01），降低MDA含量（P＜0.01），上调Bcl2mRNA的表达（P＜0.05）。结论脑益康可通过提高海马神经元的自由基清除能力，减轻脂质

2、过氧化损伤，上调Bcl2mRNA的表达来对D半乳糖损伤的海马神经元发挥保护作用，减少细胞凋亡。【关键词】脑益康；D半乳糖；海马神经元；Bcl2【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectofNaoyikangserumonhippocampalneuronapoptosisinducedbyDgalactose(Dgal).MethodsNaoyikangseruministeredpalneuron,biochemicalmethodinetheexpressionofBcl2.ResultsDgal(100μmol

3、/L)significantlydecreasedviabilityofhippocampusneurons24haftertreatment.ThepercentageofcelldeathandMDAent.ConclusionsNaoyikangcouldpreventhippocampusneuronsfromDgalinducedcytotoxicitypossiblybythemechanismofincreasingSODandGSHPxactivityandBcl2expression,pusneuron;Bcl2　　阿尔茨海默病（AD）是

4、老年人中最常见的神经系统退行性疾病，严重危害老年人的身心健康，并给其家庭和社会带来沉重负担。目前治疗AD的方法仅能缓解症状，不能改变疾病病程，尚无有效预防和治愈措施，因而研究开发有效的药物成为热点。近年来，氧化应激和氧自由基在AD发病中的作用已经被许多体外实验和临床研究所证实〔1〕。脑益康（naoyikang，NYK）是由制首乌、知母、巴戟天等组成的中药复方，具有药物多靶位作用〔2～4〕。本实验运用血清药理学方法制备脑益康药物血清，采用D半乳糖（Dgalactose，Dgal）建立AD细胞模型，观察脑益康药物血清对AD细胞模型的保护作用及其机制，为脑益康的临

5、床应用提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物　　雄性SD大鼠，体重（250±10）g；24h内SD新生鼠；均由南通大学实验动物中心提供。合格证号：SYXK（苏）20020022。　　1.1.2药品与试剂　　NYK由南通市中医院制剂室制成颗粒剂。Dgal（上海恒信化学试剂有限公司）；维生素E（VitE，南京白敬宇制药厂）；DMEM培养基（美国GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物制品公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT，上海实生细胞生物技术有限公司）；考马斯亮蓝法测蛋白试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽

6、过氧化物酶(GSHPx)试剂盒（南京建成生物医学工程研究所）。PCR引物由上海英骏生物技术服务有限公司合成。　　1.1.3仪器　　754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；核酸蛋白定量监测仪（德国Biophotometer公司）；PTC100型PCR仪（美国MJ.RESEARCH.INC.）；小源凝胶图像分析系统（上海小源科技有限公司）。　　1.2方法　　1.2.1NYK药物血清的制备　　雄性SD大鼠15只，随机分为正常对照组、VitE处理组和NYK处理组，每组5只。所有动物自由饮水，适度光照。正常对照组：喂养基本饲料观察3d后，用生理盐水10.0m

7、l/kg灌胃。VitE处理组：将VitE溶于菜油中，配成0.125%的溶液，按10.0ml/kg灌胃。NYK处理组：将中药颗粒加ddH2O，配成17.1%的水溶液，按10.0ml/kg灌胃（相当于临床成人用量）。各组大鼠每天灌胃2次，连续3d〔5〕，末次灌药后1h颈总动脉取血，4℃过夜，待全血凝固后，2500r/min离心20min，分离血清，经56℃，30min灭活，0.22μm滤膜过滤除菌，-70℃保存备用。　　1.2.2海马神经元的培养　　取新生24h的SD大鼠，无菌条件下取脑，分离双侧海马，剔除血管，用冰浴DHank′s液洗2次，剪碎，0.125%胰蛋白

8、酶2ml，