冰片联合顺铂对大鼠c6胶质细胞瘤的治疗作用

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1、冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用【摘要】探讨冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用。［方法］建立大鼠C6胶质瘤细胞模型，于治疗组给予灌服冰片及静脉注射顺铂，21天后分析治疗组与对照组胶质瘤横截面积。［结果］治疗组脑胶质瘤的横截面面积明显小于对照各组（P<0.05）。［结论］冰片能增加血脑屏障对顺铂的通透性，从而提高顺铂对胶质细胞瘤的治疗作用。【关键词】冰片；顺铂；大鼠C6胶质瘤细胞模型；血脑屏障Abstract:［Objective］Toexplorethetreatmentofratcell

2、lineC6braingliomamodelamodel，thetreatedgrouprecEivedoralborneo1andintravenousinfusionofCisplatin，theareaoftreatedgroupandcontrolgroupseanareareducedsignificantly（P<0.05）paredeabilityofblood—brainbarriertocisplatin，andincreasethetreatmentofbraingliomaamodel

3、;blood—brainbarrier　　顺式二氯二氨合铂(顺铂,Cisplatin,DDP)是20世纪70年代上市的在临床上有高度抗癌活性的药物,对于脑癌、鼻咽癌、肺癌等均有良好疗效。血脑屏障(BBB)是一个介于血液和脑脊液之间、有选择性通过能力的动态界面，对于保持脑内环境的相对稳定具有十分重要作用。由于血脑屏障的保护作用,静脉注射的顺铂难以直接进入脑组织而发挥疗效。合成冰片是外消旋龙脑的混合物,同时也是常用的开窍药和佐使药,具有“芳香走窜、引药上行”之功效。研究发现，冰片有改善BBB通透性，促进其他物质透过B

4、BB进入脑组织的作用，且能提高其他药物的血药浓度和生物利用度［12］。本实验研究中，我们旨在探讨应用冰片促进顺铂透过血脑屏障对大鼠C6胶质细胞瘤治疗的可行性，为研制新型抗脑肿瘤药物提供理论依据。　　1材料　　1.1细胞系和试剂　　C6细胞株购于中科院上海细胞生物学研究所细胞库；医用顺铂，20mg/瓶，齐鲁制药；石蜡油，500ml/瓶，南昌白云制药；冰片，购于杭州胡庆余堂；250ml生理盐水5瓶，杭州民生药业；小牛血清购于杭州四季青胰蛋白酶及培养基购于GIBCO公司10％水合氯醛(自配)：以3ml/kg剂量腹腔注

5、射麻醉大鼠；　　1.2仪器设备和器械　　细胞培养系统：ThermoScientificCRS自动化细胞培养系统；超净工作台：江苏苏净集团苏州安泰空气技术有限公司产；江湾I型大鼠脑立体定向仪：第二军医大学生产。　　1.3实验动物　　40只雄性I1640培养液,置入温度37℃、CO25％的培养箱中培养。在细胞处于指数生长期时，以胰蛋白酶适量消化3～5min后，弃去消化液。用Hanks液吹打冲洗1～2次形成细胞悬液，调细胞浓度为每10μl含1.5×106个C6细胞的悬液用于接种。　　2.2颅内接种　　将麻醉后的大鼠头部

6、固定在脑立体定向仪上，剪去头顶部毛发，碘伏消毒后铺洞巾。取内眦连线与头部正中矢状面交点向后纵向切开头皮约1cm，分离暴露颅骨。根据Batker法确定右尾状核靶点，于冠状缝前1mm，中线右旁开3mm，以牙科钻在颅骨上钻孔，孔径约1.2mm，深达硬脑膜表面而不伤及脑组织。25μl微量注射器抽取C6细胞悬液10μl，沿骨孔缓慢匀速注射10min，注射完毕后留针5min，缓慢退针，骨孔用医用明胶海绵填充，骨蜡封闭。生理盐水冲洗手术区，无菌丝线缝合切口后消毒皮肤，术后加用青霉素抗感染，整个过程在层流超净台中进行，麻醉复苏后

7、单笼常规饲养14天。　　2.3实验分组　　将40只大鼠随机分为冰片＋顺铂治疗组；单用顺铂组；冰片组；空白对照组，共4组，每组10只。　　2.4大鼠体内治疗实验　　于术后14天，实验组：灌服10％的冰片石蜡油溶液（m/v）3ml/kg/次，1h后大鼠尾静脉注射顺铂1μg/g,以后每48h给同等剂量冰片+顺铂1次,共计3次。冰片组单用冰片石蜡油溶液。空白对照组则采用同体积石蜡油溶液，无冰片组则未加冰片，其余方法相同。　　2.5试验纪录　　①观察大鼠活动状态。②肿瘤最大横径测量。于肿瘤接种21天取大鼠全脑,10%甲醛溶

8、液固定后沿肿瘤中心作冠状切面,水平方向测量每个肿瘤最大横截面面积(包括坏死等病变组织)。③组织病理学检查：所有脑标本固定，脱水，常规石蜡切片，片厚4μm，HE染色，光镜下观察。　　2.6数据统计　　统计学处理应用SPSS13.0统计软件进行LSD检验分析。　　3结果　　3.1各组大鼠于肿瘤接种成功后均于恒温台上复苏，复苏时间2～4h不等。复苏之后的大鼠逐渐恢复正常的饮食活