三氧化二砷联合顺铂抑制C6胶质瘤细胞增殖的实验研究-论文.pdf

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1、中国医药生物技术2014年6月第9卷第3期ChinMedBiotechnol，June2014，Vo1．9，No．3·论著·DOI：10．3969／cmbad．issn．1673·713X2014．03．002三氧化二砷联合顺铂抑制C6胶质瘤细胞增殖的实验研究王志刚，钟根深，马鹏举，岳双柱，周国胜【摘要】果J。同时亦有研究发现，As2O3脂质体可使更多目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合顺铂(CDDP)抑制C6的As2O3通过血脑屏障，诱导脑胶质瘤细胞凋亡，神经胶质瘤细胞增殖情况及其分子机制。并具有明显的剂量．时间依赖性关系L8J。CDDP在胶方

2、法体外实验采用MTT法检测对C6神经胶质瘤细胞质瘤的化疗中应用较为广泛，本研究欲通过As2O3的抑制率，流式细胞法检测C6胶质瘤细胞的凋亡及周期，与CDDP联合应用的体外、体内实验，来探讨临Westernblot检测caspase．3、PTEN、PI3K、Akt蛋白表达床As2O3与CDDP联合应用治疗脑胶质瘤的可水平；体内实验采用免疫组化法检测caspase一3、Ird3—0【调行性及其可能的机制；并探讨中西药结合治疗脑胶控因子的表达，并观察大鼠的生存情况。质瘤的优势。结果As2O3、CDDP及联合应用分别作用于C6神经胶质瘤细胞24h后的细胞

3、增殖最大抑制率分别为34．37％、1材料与方法1．1材料31．73％和76．40％，其相应药物浓度分别为12．5、10．0、1．1．1细胞株及实验动物C6胶质瘤细胞由河(12．5+10．0)gmol／L；两者联用后对C6胶质瘤细胞作用南省神经病学研究所提供，常规传代培养；雌性SD24h后的凋亡率分别为从单独用药时的(4．604-1．12)％、大鼠，体重150～200g，购自河南省实验动物中心，(14．594-O．79)％提高到(36．134-1．55)％；采用PI单许可证编号：SCXK(京)2013—0001，普通环境饲染检测的细胞周期也进一步证

4、明了联合用药增加了C6细养。胞的周期抑制作用。Caspase．3、PTEN蛋白在联合组c6胶质瘤细胞中表达显著上调，而PI3K、Akt蛋白在联合组1．1．2主要药物和试剂As203、CDDP(20061001)为云南生物谷灯盏花药业有限公司产品；caspase．3、C6胶质瘤细胞中表达下调；免疫组化法检测结果显示，caspase．3调控因子在联合组用药的c6胶质瘤细胞中的表Ivd3．G【、PTEN、PI3K、Akt单克隆抗体及ABC免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有达上调，而boB．a调控因子表达下调；但体内实验表明，限公司；BCA蛋白

5、定量试剂盒及定影液、显影液在18d观察期内各组大鼠的生存期无明显差异(P：购自武汉博士德生物工程有限公司。0．2531)。1．1．3主要仪器MultiskanMK3酶标仪由美国结论As2O3联合CDDP通过上调caspase-3和PTEN，ThermoElectron公司生产；BM．IX生物组织包埋下调PI3K、Akt及InB．d抑制胶质瘤细胞体内外的生长。机由孝感医疗器械公司生产；HI122型烤片机由德【关键词】顺铂；神经胶质瘤；细胞凋亡；三氧国LeicaMicrosystemNussloch公司生产；江湾化二砷：药物疗法，联合I型脑立体定向仪

6、为第二军医大学生产。中国医药!物技术2ol4．9f3)：167一i731．2方法12．1细胞培养及处理C6胶质瘤细胞常规传恶性肿瘤的术后化疗可以阻滞肿瘤细胞的生代培养，取对数生长期的细胞以5×10个／孑L接种长、侵袭及扩散，进而提高患者的生活质量，延长患者的生存期。近年来研究发现，As2O3不仅对急基金项目：国家自然科学基金青年科学基金(81201765)；河南省卫生性早幼粒细胞白血病有很好疗效，而且对实体肿科技创新型人才工程(4160)瘤，如胃癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌等也作者单位：453100河南卫辉，新乡医学院第一附属医院神经外科／河

7、南显现了一定的抗肿瘤效果[1-S]。另有研究表明，As2O3省神经病学研究所通讯作者：周国胜，Email：745772199@qq．tom：钟根深，Email：与顺铂(CDDP)联合应用，在不增加CDDP对genshenzhong@163．corn肾毒性作用情况下，还能提高CDDP的化疗效收稿日期：2013-12—31中国医药生物技术2014年6月第9卷第3期ChinMedBiotechnol，June2014，Vo1．9，No．3于96孔板中。分为4组：①对照组；~As203组；1mg／kg~④As2O3+CDDP组，腹腔注射CDDP和~CDD

8、P组；@As2O3+CDDP组。CDDP浓度分As203均为1mg／kg。连续给药7d后，每组处死别为10、5、2．5gmol／L，As