改良盐酸胍法提取脐血dna用于hla基因分型

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1、改良盐酸胍法提取脐血DNA用于HLA基因分型.L.编辑。作者：汤雪薇，廖灿，李焱，谢杏梅，黄以宁【摘要】为了比较经典的盐酸胍（Gu·HCl）抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法在提取脐血DNA的效果，探讨这两种方法在脐血组织相溶性抗原（HLA）基因分型中的应用，使用盐酸胍抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法提取72例脐血标本的DNA，并分别测定其DNA的浓度和纯度，采用序列特异性引物聚合酶反应方法（PCR-SSP）比较这两种方法所提取的DNA。　结果表明：两种方法提取脐血DNA均获成功；根据对DNA的质量监测发现，用改良盐酸胍抽提DNA在质量上较盐酸胍法好；

2、用于HLA基因分型时，改良盐酸胍抽提DNA法可减少非特异性条带的出现。　结论：改良盐酸胍抽提DNA法不但操作简便，成本下降，而且在最少血量中能提取出高纯度的DNA，减少非特异性条带的出现。该法完全可以满足脐血库的日常脐血样品DNA的提取以及脐血HLA基因分型的要求。【关键词】DNA提取　　ModifiedGuanidineHydrochlorideMethodforDNAExtractionfromCordBloodUsedinHLAGenotyping　　AbstractToparetethodsforextractinggenomicDNAfromcor

3、dbloodandtoevaluatethEirapplicationsforHLAgenotyping，thegenomicDNAfrom72samplesodifiedguanidinehydrochloride，theDNAyieldandpurityetryanddetectedbyPCRers.TheresultshoicDNAethods.ThemodifiedGu·HClmethodusedethodasthemodifiedmethodproducesbetterqualityofDNAandlessambiguousbandsinPCR.I

4、tisconcludedthatmodifiedGu·HClmethodhastheadvantagesoflopleoperation，highqualityoutputandclearpositivebandsinHLA-genotyping，themodifiedmethodisoptimalforextractingDNAfrommultiplesamplesofcordbloodbank.　　Keyethod;modifiedguanidinehydrochloridemethod;HLAgenotype高产量和高纯度的真核细胞DNA分离技术是进行

5、PCR，Southernblot等分子生物学研究的前提条件，而在HLA基因分型中，模板DNA的质量是分型结果准确性的重要保证。Boa产品），MicroSSPTM试剂盒（美国莱姆德公司产品）。　　主要仪器　　高速冷冻离心机（HermleZK380）、紫外分光光度仪（PharmaciaGeneQuatII）、PE-9600PCR仪（PerkinElmer），自动凝胶成像仪（Phamacia）。　　DNA提取　　盐酸胍法［1］　　取200μl脐血标本用生理盐水洗3-4次，离心至上层液体清晰，弃去上清液后，加入6mol/L盐酸胍200μl和0.1mol/L醋酸钠20

6、0μl（pH5.5），充分混匀，至少1小时。取以上液体至5ml冰冷无水乙醇中，小心吸放，使絮状物缠绕成团。将絮状DNA吸至新的1.5ml离心管中，离心，加70%乙醇洗1次，离心。室温干燥后加无菌水溶解。-20℃保存。　　改良盐酸胍法　　取600μl脐血标本用生理盐水洗3-4次，离心至上层液体清晰，弃去上清液后加入6mol/L盐酸胍300μl和0.1mol/L醋酸钠300μl（pH5.5），充分混匀，至少1小时。在原1.5ml离心管立即加入氯仿，颠倒混匀，离心，取上清液平分到2个新的1.5ml离心管中，分别加入等量的异丙醇，颠倒混匀至有絮状DNA沉淀出现，离心

7、，弃上清。用70%乙醇洗1次，离心。室温干燥后，一管加无菌水溶解，另一管为干粉状。-20℃保存。　　DNA质量测定　　72份经-20℃保存的CPD-A抗凝脐血标本分别采用以上2种方法进行DNA抽提，所得的DNA经PharmaciaGeneQuatⅡ紫外分光光度计测定浓度和纯度（A280/A260）。　　HLA基因配型　　采用PCR-SSP方法。随机挑选不同方法的不同脐血按操作方法按美国莱姆德公司的MicroSSPTM试剂盒（HLA-DRB）说明书进行HLA基因配型。PCR产物经常规琼脂糖电泳后，EB染色，自动成像仪照相。利用人工和电脑软件同时判读实验结果。　

8、　结果　　DNA的提取结果和纯度测定　　受测试的72