复尔康注射液对hepg2细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

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1、复尔康注射液对HepG2细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响作者：刘明华，李蓉，李茂，肖顺汉，任美萍，冯文宇【摘要】目的研究复尔康注射液对人肝癌HepG2细胞增殖和血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrog·L-1;经5，10mg·L-1的复尔康注射液作用48h后，HepG2细胞VEGF的表达明显减弱，且呈现出一定的量效关系。结论复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖和VEGF的表达，抗血管生成可能是复尔康注射液抗肿瘤的作用机制之一。【关键词】复尔康注射液;肿瘤;血管内皮生长因子;血管生成　　Abstract：ObjectiveTo

2、studytheeffectofFuerkanginjectionontheexpressionofvascularendothelialgroaG2(HepG2)cells.MethodsTheproliferationofHepG2inedbyCCK8(cellcountingkit-8)assay.TheexpressionofVEGFmunohistochemicalmethod.ResultsFuerkanginjectioncouldinhibitedtheproliferationofHepG2cells,andtheIC50valueg·L-

3、1.AftertreatmentofFuerkanginjectionatconcentrationof5，10mg·L-1for48h,FuerkanginjectionstronglyinhibitedtheexpressionofVEGFinHepG2cellsinadose-dependentmanner.ConclusionFuerkanginjectioncaninhibittheproliferationofHepG2cellsandexpressionofVEGF,andantiangiogenesismaybeoneofthemechani

4、smsofitsantitumoraction.　　Keyor;VEGF;Angiogenesis　　血管生成(angiogenesis)是指已存的血管(毛细血管和小静脉)通过出芽或分裂的方式产生新的血管[1]。目前抑制肿瘤血管生成已成为抗肿瘤治疗的一个重要方向与研究热点。复尔康注射液是从中药青蒿中提取出有效成分青蒿油，研制成能供静脉给药的多相脂质体注射液。前期的研究结果显示，复尔康注射液能抑制荷H22实体瘤的生长，对荷P388和H22腹水瘤小鼠有明显生命延长作用，对A549和CEM-C7细胞株的生长有抑制作用。为深入探讨复尔康注射液抗肿瘤的分子机制，本实验

5、研究了复尔康注射液对人肝癌HepG2细胞VEGF表达的影响。　　1材料　　1.1药品和试剂复尔康注射液由泸州医学院药物研究所提供，批号：061017;RPMI1640培养基，GIBCO公司产品;CCK8(cellcountingkit-8)，碧云天生物技术研究所提供;标准胎牛血清，天津灏洋生物制品科技责任有限公司产品，批号：20070112;SABC试剂盒和DAB显色剂由武汉博士德生物工程有限公司提供，批号：070119。　　1.2细胞株人肝癌HepG2细胞，在含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，37℃、5%CO2条件下常规培养。　　2方法　　2.1C

6、CK8检测对HepG2细胞增殖的影响取对数生长期的HepG2细胞，0.25%胰酶制成细胞悬液，细胞计数为1×108·L-1，接种于96孔板，每孔90μl，空白孔加90μlRPMI1640，37℃，5%CO2培养箱培养24h后每孔加药10μl，每个浓度4个复孔，复尔康终浓度分别为2.5，5，10，20，40，80mg·L-1，阴性对照组加等体积无血清RPMI1640，继续培养48h，每孔加入CCK810μl继续培养1h，酶标仪450nm波长下检测各孔吸光度A值，按下列公式计算抑制率，细胞增殖抑制率(%)=[1-(A给药组-A空白孔)/(A阴性对照组-A空白孔)

7、]×100﹪，LOGIT法计算半数抑制浓度(IC50)。　　2.2免疫组化SABC法检测VEGF的表达调整HepG2细胞悬液密度为5×107·L-1。接种于预先铺好盖玻片的24孔板，每孔450μl，37℃，5%CO2培养箱培养24h。每孔加药50μl，使其终浓度分别为5，10mg·L-1(分别设为复尔康注射液低、高剂量组)，同时设复尔康注射液终浓度为10mg·L-1时相应的溶剂为溶媒对照，阴性对照组加等体积无血清RPMI1640，37℃，5%CO2培养箱继续培养48h。吸净培养液，PBS液洗2次，勿使细胞脱落。按免疫组化SABC染色试剂盒说明书步骤染色、封片

8、、显微镜观察。胞浆和胞膜出现棕黄色颗粒为VEGF阳性