复尔康注射液抗肿瘤活性研究及对血管生成的影响

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1、中图分类号：R965;R979.1硕士学位论文复尔康注射液抗肿瘤活性研究及对血管生成的影响院（系）、所药学院研究生姓名宋姗姗学科、专业药理学导师姓名刘明华教授二Ο一二年四月目录1复尔康注射液抗肿瘤活性研究及对血管生成的影响„„„11.1中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11.2英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31.3前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„61.4材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„101.5结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„191.6讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

2、„„„„271.7结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„331.8参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„352血管内皮生长因子与肿瘤血管生成的研究进展（综述）„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„383致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„47复尔康注射液抗肿瘤活性研究及对血管生成的影响摘要目的：复尔康注射液是从中药青蒿中提取出有效成分青蒿油，与甘草酸铵和维A酸组合研制成的能供静脉给药的多相脂质体注射液。前期研究结果显示复尔康注射液能明显抑制人肝癌HepG2细胞的增殖，诱导其凋亡，且能不同程度减弱HepG2细胞VEGF

3、的分泌表达。本研究检测了复尔康注射液的体外、体内抗肿瘤活性，以及体外对肿瘤血管生成的影响，旨在进一步阐明复尔康注射液的抗肿瘤活性及其分子机制，为复尔康注射液的在肿瘤治疗中的应用提供科学的实验依据。方法：（1）体外抗肿瘤活性：以人红白血病细胞K562、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞BeL-7402、人结肠癌细胞HCT116和人黑色素瘤细胞KB为细胞模型，采用CCK-8试剂盒（CellCountingKit-8），测定复尔康注射液对人肿瘤细胞株增殖的抑制作用。（2）体内抗肿瘤活性：①建立小鼠肝癌H22细胞实体瘤模型（S型）和腹水瘤模型（A型），小鼠尾静脉注射给

4、药10天，以肿瘤生长的抑制率（抑瘤率）和生命延长率测试复尔康注射液对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响；②建立人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型，在接种后第15天，去除移植瘤未生长或3移植瘤生长过缓、过速的裸小鼠，选择体内已形成瘤块且瘤径约≥50mm的裸鼠用于实验。采用腹腔注射给药，每周连续给药5天后停药2天，共给药4周。每周测量瘤径和体重3次，通过比较肿瘤体积、相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率的变化检测复尔康注射液对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。（3）体外对血管生成的影响：采用CCK-8assay、Woundinghealingassay和Tubeformationassa

5、y等检测复尔康注射液对人微血管内皮细胞HMEC增殖、迁移和小管形成的影响。结果：（1）体外抗肿瘤活性：复尔康注射液能明显抑制K562、SMMC-7721、BeL-7402细胞的增殖，随着浓度的增加，抑制作用增强，呈现出良好的量效关系，其IC50分别为（31.751.50）、(61.511.58)和(68.397.16)µg/mL，活性较强，但对HCT116和KB细胞的抑制作用较弱。1-1（2）体内抗肿瘤活性：①复尔康注射液6.25、12.5和25mgkg剂量组对小鼠肝癌H22实体瘤（S型）生长的抑制百分率（抑瘤率）分别为21.50%、39.10%、49.36

6、%，与阴性对照组比较，差导有统计学意义（P<0.05），但同样的剂量复尔康注射液对小鼠肝癌H22腹水瘤(A型)无明显的抑制作用，不能显著延长小鼠的生存时间；②复尔康注射液126、252、378mg·kg-1治疗组和阳性对照康康莱特注射液均不同程度抑制裸鼠移植瘤的生长，腹腔注射给药4周后，TV、RTV和[T/C(%)]明显下降，低、中、高剂量组[T/C(%)]分别为57.75%、39.9%和44.08%，与阴性对照组比较，P<0.05。（3）体外对血管生成的影响：复尔康注射液明显抑制人微血管内皮细胞HMEC的增殖，-1-1IC50为11.443.97mg·L；复尔康

7、注射液在3.125mg·L时即分别表现出抑制HMEC细胞迁移和小管形成的作用，且随着浓度的增加，抑制作用愈明显，呈现出较好的剂量依赖关系。结论：复尔康注射液体外对白血病及肝癌细胞株作用明显，但对其他实体瘤细胞作用差，对肿瘤细胞具有一定的选择性。复尔康注射液体内对小鼠肝癌H22实体瘤（S型）和人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的肿瘤的生长具有明显抑制作用，但同样的剂量下不能延长H22腹水瘤(A型)小鼠的生存时间。复尔康注射液具有抗新生血管生成的作用，体外能明显抑制HMEC的增殖、迁移和小管形成，结合其体内抗肿瘤活性强，推测抗血管生成可能也是其体内抗肿瘤的作用机