甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

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1、甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响作者：杨涛，葛郁芝，罗骏，胡朗吉，张淑华，吴志婷【摘要】　　目的研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响，探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制。方法用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞，采用全细胞膜片钳记录技术，观察不同浓度的甘松挥发油对钠通道的影响。结果①浓度为1，3，5，10，20，100μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制钠电流；②可使心肌细胞钠电流-电压曲线上移，但激活电位、峰电位及反转电位无改变；③使激活曲线向正电位方向变化，V1/2从(-43.65±0.98)mV右移至(-40.25±1.01)mV(n=6，P<0

2、．05)；④使失活曲线向负电位方向变化,V1/2从(-100.92±0.68)mV左移至(-111.20±0.86)mV(n=6，P<0.05)。结论甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜钠通道电流，在不同膜电位水平对钠通道电流具有均匀一致的抑制作用；使激活曲线右移，使失活曲线左移。【关键词】甘松　膜片钳　钠通道　心肌细胞　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofthevolatileoilofNardostachyschinensisonsodiumchannelinisolatedventricularmyocytes.Me

3、thodsSingleventricularmyocyteofrataticdissociationmethod．TheprecordingtechniquecurrentbydiferentdosagesofthevolatileoilofNardostachyschinensisfrom1to100ppm.ResultsThevolatileoilofNardostachyschinensisdecreasedsodiumcurrentinadose-dependentmanner.Thecurrent-voltagecurvemovedupovedtomorepositive

4、potentialandtheinactivationcurvemovedtomorenegativepotential．ConclusionThevolatileoilofNardostachyschinensiscoulddecreasesodiumchannelcurrentinadose-dependentmanner,theactivationcurveisshiftedtoptechniques；Sodiumchannel；Myocardium甘松为败酱科甘松属植物，具有抗心律失常作用［1，2］，甘松挥发油是甘松有效浓缩成分［3］，其抗心律失常的机制已有初步研究［4］。

5、本研究应用膜片钳全细胞记录技术，观察甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道电流(INa)的影响，从离子通道水平探讨其作用机制。　　1材料与仪器　　1.1材料健康成年雌雄性大鼠，体质量250～300g，由南昌大学医学院动物所提供。甘松挥发油由江西省樟树市中医药研究所提供，用阴干后的甘松样品1000g，按《中国药典》Ⅰ部甲法进行水蒸馏，经6h后停止加热，静置过夜，油水相分离后得浅绿色油状液体［5］。I型胶原酶(collagenaseI)、HEPES(N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸)，CsC1(氯化铯)，谷氨酸，TEA-C1(氯化四乙胺)，Na2ATP，EGTA为Sigma公司产品。其它

6、试剂均为国产分析纯。　　1.2仪器膜片钳放大器(Axopatch200B)及DigiData1200B型数/模（或模/数）转换器均为美国Axon公司。　　2方法　　2.1灌流过滤以5U/g肝素钠对分离大鼠进行腹腔内注射，10～15min后以1%戊巴比妥钠50mg/kg腹腔内注射麻醉，迅速开胸取出心脏，放入4℃无钙液中，离体心脏修饰后经主动脉挂在Langendorf灌流仪逆行用无钙台氏液经主动脉逆行灌流5min，通以100%纯氧。10min后以浓度分别为0.6～0.7g/LI型胶原酶，0.04～0.06g/L蛋白酶E，0.3～0.5g/L牛血清白蛋白（BSA）和50μmol/L低钙酶

7、液灌流心脏。30min左右心脏松软后，改180～200μmol/L低钙台氏液灌流心脏5min，温度维持在36～37℃，灌流过程中始终予以氧气饱和，氧流量0.3～0.5L/min。5min后，将心脏从灌流装置上取下，剪除心房和乳头肌,留下心室肌组织块置于盛有KB液的烧杯中充分剪碎、轻轻吹打、100目尼龙网过滤，以去除可能影响离子流记录的组织碎片。过滤后置于KB液中室温下孵育1～2h，然后置于4℃冰箱中保存。　　2.2溶液配制无钙台氏液(mmol/L)：NaCl136，K