一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量

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1、一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量：黄帅，马淼，黄倩倩，符颖，魏建和，潘瑞乐【摘要】目的首次将一测多评分析方法应用于柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量测定，为柴胡药材多指标质量评价奠定基础。方法以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，采用t-检验法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法对柴胡药材中3种皂苷含量测定的准确性和科学性。结果在一定的线性范围内，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.73

2、5，0.944，且在不同的实验条件下重现性良好(RSD=0.70%，0.56%);常规的外标法对柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的实测含量与一测多评法计算的含量没有显著性差异，经统计学t检验，P>0.05，实验所得校正因子可信。结论该方法使用一个对照品可同时测定柴胡药材中3种柴胡皂苷的含量，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依据。【关键词】一测多评;高效液相色谱;校正因子;柴胡;柴胡皂苷中药的质量评价和控制是制约中药现代化、国际化发展的关键问题之一，也一直是中医药研究的难点和热点。然而，由于中药本身的复杂性，现行以单一活性成分或指标成分定性定量分析为核心的质量控

3、制模式，已不能适应全面控制中药质量的要求，多指标综合质量控制模式已成为中药质量评价和控制的发展趋势。由于多指标质量控制模式需要足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大，有些单体结构不稳定难以分离或分离成本过高等因素，致使中药多指标成分质量控制仅限于科研，在实际生产应用中很难推广。王智民等[1]利用中药有效成分内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分(对照品易得者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控，并已成功运用于木通3种有效成分及人参与三七药材中多种人参皂苷含量的同步测定[1，2]。　　中药柴胡为伞形科(Umbellif

4、erae)柴胡属(Bupleurum)植物,柴胡BupleurumchinenseDC.(北柴胡)及狭叶柴胡B.scorzonerifoliump，power工作站。电子分析天平(上海天平仪器厂)，KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，乙腈、甲醇为色谱纯(Fisher公司)。Wahaha纯净水(市售)，提取用甲醇为分析纯(北京化工厂)。　　柴胡皂苷a(批号110777-200406)和柴胡皂苷d(批号110778-200505)均由中国药品生物制品检定所提供，柴胡皂苷c由本实验室分离纯化，HPLC(面积归一化法)纯度>98%。柴胡药材收集自不

5、同产地，经鉴定为北柴胡B.chinenseDC.的干燥根。对照品结构式见图1。　　图1柴胡皂苷a(1)，柴胡皂苷d(2)和柴胡皂苷c(3)的结构式　　2方法与结果　　2.1方法原理在一定的线性范围内成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比，即：)①。式中Ai为组分i的峰面积;之间的相对校正因子，有fkm=fk/fm=()/(×Ak)②。由此可导出定量计算公式：=()/(fkm×Ak)③。式中Ak为内标物峰面积，为组分m的峰面积，为组分m的量。　　2.2一测多评方法学考察　　2.2.1色谱条件色谱柱为VenusiASB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动

6、相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0～50min,25→90%A;50～55min,90→90%A;55～60min,90→25%A;60～70min,25→25%A);流速1.0ml·min-1;柱温30℃;检测波长210nm。在上述色谱条件下，SSc，SSa，SSd与其它峰能达到较好的分离。对照品及样品HPLC图谱见图2。　　2.2.2对照品溶液的制备精密称定柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品1.02，2.05，2.39mg置于同一2ml量瓶中，用色谱甲醇定容，制得混合对照品溶液，于4℃保存备用。　　1.SSc2.SSa3.SSd　　图2对照品(A)及样

7、品(B)的HPLC图　　2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末(过60目筛)约0.5g，精密称定，置50ml三角瓶中，加入5%氨水甲醇溶液25ml，密闭，于30℃水温超声处理30min，滤过，滤渣用甲醇润洗两次，每次10ml，合并滤液，回收甲醇至干。残渣加甲醇(色谱纯)溶解并转移至5ml量瓶中，过0.45mm的微孔滤膜，即得。　　2.2.4线性范围精密吸取上述混合对照品溶液2,5,10,15,20μl注入高效液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件进行分析。分别以对照品量C(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴