一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量

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1、一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量：黄帅，马淼，黄倩倩，符颖，魏建和，潘瑞乐【摘要】目的首次将一测多评分析方法应用于柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量测定，为柴胡药材多指标质量评价奠定基础。方法以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，采用t-检验法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法对柴胡药材中3种皂苷含量测定的准确性和科学性。结果在一定的线性范围内，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.735，0.94

2、4，且在不同的实验条件下重现性良好(RSD=0.70%，0.56%);常规的外标法对柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的实测含量与一测多评法计算的含量没有显著性差异，经统计学t检验，P>0.05，实验所得校正因子可信。结论该方法使用一个对照品可同时测定柴胡药材中3种柴胡皂苷的含量，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依据。【关键词】一测多评;高效液相色谱;校正因子;柴胡;柴胡皂苷中药的质量评价和控制是制约中药现代化、国际化发展的关键问题之一，也一直是中医药研究的难点和热点。然而，由于中药本身的复杂性，现行以单一活性成分或指标成分定性定量分析为核心的质量控制模式，已不能适应全面控

3、制中药质量的要求，多指标综合质量控制模式已成为中药质量评价和控制的发展趋势。由于多指标质量控制模式需要足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大，有些单体结构不稳定难以分离或分离成本过高等因素，致使中药多指标成分质量控制仅限于科研，在实际生产应用中很难推广。王智民等[1]利用中药有效成分内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分(对照品易得者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控，并已成功运用于木通3种有效成分及人参与三七药材中多种人参皂苷含量的同步测定[1，2]。　　中药柴胡为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum

4、)植物,柴胡BupleurumchinenseDC.(北柴胡)及狭叶柴胡B.scorzonerifoliump，po)①。式中Ai为组分i的峰面积;之间的相对校正因子，有fkm=fk/fm=()/(×Ak)②。由此可导出定量计算公式：=()/(fkm×Ak)③。式中Ak为内标物峰面积，为组分m的峰面积，为组分m的量。　　2.2一测多评方法学考察　　2.2.1色谱条件色谱柱为VenusiASB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0～50min,25→90%A;50～55min,90→90%A;55～60min,90→25%A;60

5、～70min,25→25%A);流速1.0ml·min-1;柱温30℃;检测波长210nm。在上述色谱条件下，SSc，SSa，SSd与其它峰能达到较好的分离。对照品及样品HPLC图谱见图2。　　2.2.2对照品溶液的制备精密称定柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品1.02，2.05，2.39mg置于同一2ml量瓶中，用色谱甲醇定容，制得混合对照品溶液，于4℃保存备用。　　1.SSc2.SSa3.SSd　　图2对照品(A)及样品(B)的HPLC图　　2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末(过60目筛)约0.5g，精密称定，置50ml三角瓶中，加入5%氨水甲醇溶液25ml，密闭，

6、于30℃水温超声处理30min，滤过，滤渣用甲醇润洗两次，每次10ml，合并滤液，回收甲醇至干。残渣加甲醇(色谱纯)溶解并转移至5ml量瓶中，过0.45mm的微孔滤膜，即得。　　2.2.4线性范围精密吸取上述混合对照品溶液2,5,10,15,20μl注入高效液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件进行分析。分别以对照品量C(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的标准曲线回归方程及线性范围(见表1)，表明各化合物在相应范围内线性关系良好。　表1线性关系实验结果　　2.2.5校正因子计算以SSa为内标，按“2.1”项下公

7、式②，分别计算SSa对SSc和SSd的校正因子，见表2。表2SSa对SSc和SSd的相对校正因子　　2.2.6精密度实验精密吸取同一混合对照品溶液20μl，连续进样6次，记录SSc,SSa和SSd的峰面积，其峰面积的RSD分别为1.40%，1.30%和1.47%。表明仪器精密度良好，符合含量测定要求。　　2.2.7稳定性实验取同一供试品溶液20μl分别于0，2，4，6，8，10h进样测定，记录SSc,SSa和SSd峰面积，其峰面积的RSD分别为1.70%,2.00%和2.10%。表明SSc、