河豚毒素停搏液对心肌粘合连接的影响

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1、河豚毒素停搏液对心肌粘合连接的影响【摘要】目的:研究Na+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)停搏液对离体大鼠心肌粘合连接的影响.方法:IRI）显示出一定的优势，有关的研究主要集中在对细胞器等方面，而对细胞粘合连接的研究还少见报道.本实验旨在观察以TTX阻断Na+通道为特点的心脏停搏液在MIRI中对粘合连接的影响，同时监测心功能的变化，以探讨其可能的机制.　　1材料和方法　　1.1材料成年L870B2Langendorff离体心脏灌流系统（澳大利亚ADInstruments公司）.KrebsHensele

2、it液（KH液)(mmol/L)成分：NaCl119，NaHCO325，KCl4.75，MgSO41.2，KH2PO41.18，CaCl21.4，Glucose11，42.41(mol/L)O2+2.23(mol/L)CO2混合气持续氧合，维持pH7.8（自行配制）；TTX心脏停搏液：质量浓度为20μmol/L的TTX加入KH液中；STH2心脏停搏液成分(mmol/L)：NaCl110.0，KCl16.0，MgCl216.0，CaCl22.0，Glucose11.0,维持pH7.8（自行配制）

3、.　　1.2方法　　1.2.1实验分组将20只大鼠随机分为TTX组和STH2（St.Thomas2)组，每组大鼠10只.TTX组采用TTX心脏停搏液停搏；STH2组采用STH2心脏停搏液停搏.　　1.2.2实验模型的建立大鼠腹腔注射肝素盐水200IU，20min后脱颈处死，迅速取出心脏，建立离体鼠心Langendorff和Neely灌注模型.用37℃,42.41(mol/L)O2+2.23(mol/L)CO2混合气持续氧合的KH液经主动脉根部逆行灌注，压力60mmHg(1mmHg=0.13

4、3kPa)，稳定15min.左心房插管，左心室置入测压管，灌注液转流，转为工作心脏灌注模型，灌注压15mmHg，后负荷52～60mmHg，稳定5min，测定心率（heartrate，HR）、冠状动脉流量（coronaryarteryfloaximalriseinleftventricularpressure/maximalfallinleftventricularpressure，±dp/dt.工作15min后，主动脉根部按2mL/100g质量注入4℃心脏停搏液使心脏停搏，并观察心脏停搏时间.停搏3

5、0min后再经主动脉根部按2mL/100g质量注入心脏停搏液停搏，停搏过程中同时给予4℃盐水纱布冷敷.停搏60min后给予37℃,42.41(mol/L)O2+2.23(mol/L)CO2混合气持续氧合的KH液经主动脉根部逆行复灌，观察心脏复搏时间.15min后转为工作心脏灌注模型，共复灌60min，并在工作心灌注稳定后40min测定血流动力学参数，血流动力学参数的恢复率用复搏后的参数除以停跳前的相应参数.20min后停止实验，取部分左心室肌50mg，-80℃保存，用于心肌Ncadherin和α

6、actin的检测.　　1.2.3心肌Ncadherin和αactin的免疫组化检测取3mm×3mm×3mm大小心肌组织行石蜡切片，SABC法行免疫组化染色，光学显微镜观察心肌Ncadherin和αactin的分布情况并采集图像，采用imageproplus6.0图像分析系统进行半定量检测，用平均吸光度A值表示Ncadherin和αactin的相对含量.　　1.2.4心肌αactin的g心肌组织，提取总蛋白，BCA法定量，蛋白电泳分离、转膜、抗原抗体反应及ECL显色，采用quanti

7、tyone图像分析系统采集图像并行半定量分析.　　2.2血流动力学参数比较心脏停搏前，两组的血流动力学各项指标差异无统计学意义(P>0.05)；心脏复搏后40min，TTX组的HR，CAF,LVESP和±dp/dt恢复率明显优于STH2组，差异均有统计学意义(其中HR，CAF,LVESP，P<0.01,±dp/dt，P<0.05，表1).　　表1再灌注期间两组血流动力学参数恢复率（略）　　aP<0.05,bP<0.01vsSTH2.　　2.3心肌组织中Ncadhe

8、rin和αactin的改变免疫组化结果显示，STH2组心肌组织中Ncadherin和αactin分布紊乱，其表达量较TTX组明显减少.TTX组和STH2组的Ncadherin和αactin的表达量分别为0.06765±0.00027和0.07375±0.00049；0.02426±0.00025和0.03047±0.00017.IRI时二者相互影响.膜片嵌实验证实缺血缺氧时心肌细胞的持续Na+内流显著增加.TTX通过阻断持续的Na+流对心肌产生保护作用［