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1、非诺贝特对糖尿病大鼠肾组织MCP1、FN表达的影响：袁江永,谢小娟 李英,王丽梅【摘要】目的:探讨非诺贝特对糖尿病大鼠肾组织MCP1、FN表达的影响。方法:选择健康雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DN组)和非诺贝特治疗组(DF组),每组12只,模型组及治疗组以链脲佐菌素诱发糖尿病,治疗组给予非诺贝特灌胃。分别于第4、8周观察各组大鼠脂代谢、血肌酐及24h尿蛋白定量。肾组织标本行免疫组化检测肾组织MCP1、FN的表达水平。结果:模型组胆固醇、甘油三酯、肌酐及24h尿蛋白定量水平的表达水平较同期正常组(P<0.01)和治疗组(P<0.05
2、)有明显的增加。模型组大鼠肾组织MCP1、FN表达较同期正常组(P<0.001)和治疗组(P<0.01)有明显的增加。结论:非诺贝特可以下调糖尿病大鼠肾组织MCP1、FN表达对试验性糖尿病大鼠具有部分肾保护作用。【关键词】非诺贝特;糖尿病肾病;单核巨噬细胞趋化蛋白1;纤维连接蛋白糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病最严重的并发症之一,是DM致死、致残的主要原因。近来的研究表明单核巨噬细胞趋化蛋白1(monocytchemoattractantprotein1,MCP1)在糖尿病肾病肾组织表达增加,以炎症形式促进DN进展。非诺贝特广
3、泛用于动脉粥样硬化、糖尿病等疾病的降脂治疗,近来动物实验研究发现非诺贝特可以抑制糖尿病大鼠的TGFβ1而对糖尿病大鼠有部分肾保护作用。本实验我们以SD大鼠建立糖尿病大鼠模型,用非诺贝特治疗,免疫组化测定MCP1及FN的表达,研究非诺贝特肾保护的机制及其与MCP1和FN的关系。 1材料和方法 1.1材料体质量180～200g的雄性SD大鼠36只(购于河北医科大学实验动物中心合格证编号:DK04020098)。链脲佐菌素(STZ)(sigma公司,批号040103);MCP1、FN抗体、第二抗体生物素标记的兔抗大鼠抗体(武汉博士德公司)。非诺贝特胶囊(法国利博福尼公司,批号
4、H20040004)。 1.2方法 1.2.1动物模型建立、分组动物随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DN组)、非诺贝特治疗组(DF组),每组12只。DN组及DF组大鼠腹腔注射STZ60mg/kg,72h后测尾静脉血糖≥16.7mmol/L,尿糖3﹢～4﹢,确定为糖尿病大鼠。 1.2.2给药取材次日,DF组给予非诺贝特40mg/(kg·d)灌胃,DN组、NC组只给等量自来水灌胃,试验期间,所有大鼠自由进食水,不给胰岛素及其它降糖药物治疗。于灌胃4周和8周末,各组随机选取大鼠6只,宰杀前1d置代谢笼,收集24h尿,测尿量并离心,待测尿蛋白;先称重,然后断头取血,分离血清,待
5、测血生化;取肾组织用100mL/L甲醛溶液固定,待测免疫组化检查。 1.2.3生化指标测定采用Beckmen全自动生化分析仪测定血糖、血甘油三酯、胆固醇、血肌酐、尿蛋白,并计算24h尿蛋白定量,结果用体质量矫正。 1.2.4免疫组化染色组织标本经甲醛固定,石蜡切片脱蜡至水,孵育后胰蛋白酶封闭,加入第一抗体(MCP1、FN抗体)第二抗体,再加辣根过氧化物酶标记卵白素复合物,孵育显色,树脂封片,最后用高清晰彩色病理图像免疫测量系统(HPLAS1000)进行分析。MCP1测定:每张切片随机选取5个肾小球,计算每个肾小球内抗体染色阳性细胞数,以均值表示每例肾小球横切面(glomer
6、ulumcrosssection,GCS)中阳性细胞数,计算每张切片皮质区50个高倍视野下阳性小管数与总肾小管数的百分数,以均值表示每例肾小管中的阳性率。FN的测定:每个标本按次序选5个视野,做灰度扫描,测定每个视野细胞外基质着色面积,取其平均值。 1.2.5统计学分析数据以x±s表示,所有数据用SPSS13.0统计软件处理,组间比较用方差分析和q检验。 2结果 2.1一般状况DN组及DF组在注射STZ后第4～5日即出现多饮、多尿、多食,,逐渐消瘦,垫料潮湿甚至成稀泥状,须每日更换垫料,而NC组大鼠饮食正常,体质量增加,毛色有光泽。 2.2生化测定的比较DN组及DF组的血胆
7、固醇、甘油三酯血肌酐及24h尿蛋白定量均高于NC组(P<0.01),DF组低于DN组(P<0.05,表1)。 2.3免疫组化肾组织MCP1、FN的比较DN组大鼠在第4周及第8周MCP1FN的表达均较NC组高(P<0.01),治疗后的DF组大鼠MCP1、FN的表达较DN组有明显的下降(P<0.05),但较NC组仍高(表2)。表1鼠血TC、TG、Scr及24h尿蛋白定量表2大鼠肾组织MCP1与FN的表 近来研究证明在糖尿肾病
