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时间:2018-11-10
《谷氨酸钠诱导大鼠肥胖对下丘脑弓状核npy、obr表达的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、谷氨酸钠诱导大鼠肥胖对下丘脑弓状核NPY、ObR表达的影响【摘要】目的探讨谷氨酸钠诱导大鼠肥胖后对下丘脑弓状核神经肽Y(NPY)、瘦素受体(ObR)表达的影响。方法给新出生雌性ethodsSubcutaneousinjectionofglutamicsodiumtoratsfor5continuingdaystocreatemodelofobesity.Thehypothalamusadeintofrozensectionsandstainedunderthesamecondition.Usingsp
2、ecificNPYantibody(1∶200)andObRantibody(1∶200)byABCimmunohistochemistrymethod.ToobservetheexpressionsofNPYandleptinreceptorinarcuatenucleusofhypothalamus.Results80%ratsinducedbyglutamicsodiumshousicsodiumcancauseupregulationofNPYanddous.【Keyicsodium,arc
3、uatenucleus,rats瘦素(leptin)是ob基因的表达产物,由脂肪组织分泌,含167个氨基酸残基,通过作用于其受体发挥作用。目前研究认为,leptin与肥胖有关,leptin在下丘脑通过与其受体(ObR)作用引起神经肽Y(neuropeptideY,NPY)表达的改变,而NPY是由下丘脑弓状核(ARC)产生的一种激素,为食欲的强烈刺激因子,NPY通过中枢和外周机制调节食欲,引起脂肪聚集,导致肥胖。给新生期鼠注射谷氨酸钠可以导致动物肥胖,此肥胖模型弓状核NPY、ObR的表达情况如何,尚未
4、见报道。本研究拟采用注射谷氨酸钠建立肥胖大鼠模型探讨其表达情况。1材料与方法1.1模型制作新生雌性SG,3mg/g体重),对照组也按2、4、6、8、10d注射等量生理盐水,共5次,1个月后断奶,断奶后给大鼠以常规饲料和水,连续8周后,测量所有大鼠体重及体长,依据Lee指数舍去不符合标准的大鼠。得到实验组肥胖大鼠33只,对照组非肥胖大鼠31只。1.2动物取材筛选出的肥胖动物模型及对照组于生后90日龄,戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(1.3ml/kg)后,行4%多聚甲醛心内灌注固定,取各组灌注较好的动物各25只,断
5、头取下丘脑后固定,后入20%蔗糖PBS沉底。1.3免疫组织化学染色参照Koning等大鼠脑定位图谱,从A5150~A3180[弓状核(ARC)正中隆起(ME)所在的平面],恒冷箱切片,片厚20 μm。每例间隔取片5张,行ABC法免疫组化染色,所用抗体浓度NPY(1∶200),ObR(1∶200)(以上抗体均购自武汉博士德生物工程公司)。1.4图像分析将切片置于10倍光学显微镜下观察下丘脑ARC,并用MIAS2000(MicroimageAnalysisSystem)图像分析系统进行处理,测定下丘脑
6、ARC阳性细胞及阳性纤维灰度值。每例随机取一张切片,每张切片随机取两个视野,共计50个视野,得到50个数据。1.5统计学方法应用SPSS11.0软件包对实验结果行统计分析,各组统计量以均数±标准差(x±s)表示,先行单因素方差分析,方差齐性检验后行配对t检验,P<0.05有统计学意义。2结果NPY、ObR免疫阳性产物均见于实验组及对照组下丘脑弓状核神经元的胞体,部分神经纤维也呈阳性反应。实验组大鼠下丘脑弓状核NPY免疫阳性细胞及阳性神经纤维灰度值明显高于对照组(见图1、2);实验组大鼠下丘脑弓状核平面
7、ObR免疫阳性胞体及纤维表达较对照组明显减弱(见图3、4),两组数据详见表1。表1各组NPY、ObR阳性细胞及阳性纤维灰度值注:*与对照组比较,P<0.053讨论随着现代生活水平的提高,肥胖的发生率逐年上升。因此,肥胖的发生机制一直是人们关注的热点,1994年Zhang等[1]首次从小鼠和人的脂肪组织中分离并克隆出肥胖基因(ob基因),ob基因编码的蛋白质为leptin,主要由脂肪组织产生,脂肪组织分泌的leptin入血后,通过脉络丛进入脑脊液,流入第三脑室,然后通过室管膜层转运至下丘脑与相应核团上
8、的leptin受体(ObR)结合。leptin具有广泛的生物学效应,与肥胖的关系已引起共识,其主要作用的部位为下丘脑,尤其是弓状核,通过与弓状核上的ObR结合来调节机体脂肪的多少。NPY作为中枢主要的促食欲肽,对leptin的调节起着重要作用[2]。已有实验证实,NPY神经元上有ObR分布[3],提示NPY是介导leptin发挥作用的重要调质。研究发现,脑室内注射leptin可以明显下调NPYmRNA的表达并抑制摄食[4],NPY成为
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