谷氨酸钠诱导大鼠肥胖对下丘脑弓状核npy、obr表达的影响

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1、谷氨酸钠诱导大鼠肥胖对下丘脑弓状核NPY、ObR表达的影响：张连双王希锋张洪芹赵伟李雅娜时彦【摘要】目的探讨谷氨酸钠诱导大鼠肥胖后对下丘脑弓状核神经肽Y(NPY)、瘦素受体（Ob?R）表达的影响。方法给新出生雌性ethodsSubcutaneousinjectionofglutamicsodiumtoratsfor5continuingdaystocreatemodelofobesity.Thehypothalamusadeintofrozensectionsandstainedunderthesamecondition

2、.UsingspecificNPYantibody(1∶200)andOb?Rantibody(1∶200)byABCimmunohistochemistrymethod.ToobservetheexpressionsofNPYandleptinreceptorinarcuatenucleusofhypothalamus.Results80%ratsinducedbyglutamicsodiumshousicsodiumcancauseup?regulationofNPYanddous.【Keyicsodium，arcu

3、atenucleus，rats瘦素（leptin）是ob基因的表达产物，由脂肪组织分泌，含167个氨基酸残基，通过作用于其受体发挥作用。目前研究认为，leptin与肥胖有关，leptin在下丘脑通过与其受体（Ob?R）作用引起神经肽Y（neuropeptideY,NPY）表达的改变，而NPY是由下丘脑弓状核（ARC）产生的一种激素，为食欲的强烈刺激因子，NPY通过中枢和外周机制调节食欲，引起脂肪聚集，导致肥胖。给新生期鼠注射谷氨酸钠可以导致动物肥胖，此肥胖模型弓状核NPY、Ob?R的表达情况如何，尚未见报道。本研究拟采用

4、注射谷氨酸钠建立肥胖大鼠模型探讨其表达情况。1材料与方法1.1模型制作新生雌性SG，3mg/g体重），对照组也按2、4、6、8、10d注射等量生理盐水，共5次，1个月后断奶，断奶后给大鼠以常规饲料和水，连续8周后，测量所有大鼠体重及体长，依据Lee指数舍去不符合标准的大鼠。得到实验组肥胖大鼠33只，对照组非肥胖大鼠31只。1.2动物取材筛选出的肥胖动物模型及对照组于生后90日龄，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（1.3ml/kg）后，行4%多聚甲醛心内灌注固定，取各组灌注较好的动物各25只，断头取下丘脑后固定，后入20%蔗糖PBS

5、沉底。1.3免疫组织化学染色参照Koning等大鼠脑定位图谱，从A5150～A3180［弓状核（ARC）?正中隆起（ME）所在的平面］，恒冷箱切片，片厚20　μm。每例间隔取片5张，行ABC法免疫组化染色，所用抗体浓度NPY（1∶200）,Ob?R(1∶200)（以上抗体均购自武汉博士德生物工程公司）。1.4图像分析将切片置于10倍光学显微镜下观察下丘脑ARC，并用MIAS?2000（MicroimageAnalysisSystem）图像分析系统进行处理，测定下丘脑ARC阳性细胞及阳性纤维灰度值。每例随机取一张切片，每张

6、切片随机取两个视野，共计50个视野，得到50个数据。1.5统计学方法应用SPSS11.0软件包对实验结果行统计分析，各组统计量以均数±标准差（x±s）表示，先行单因素方差分析，方差齐性检验后行配对t检验，P＜0.05有统计学意义。2结果NPY、Ob?R免疫阳性产物均见于实验组及对照组下丘脑弓状核神经元的胞体，部分神经纤维也呈阳性反应。实验组大鼠下丘脑弓状核NPY免疫阳性细胞及阳性神经纤维灰度值明显高于对照组（见图1、2）；实验组大鼠下丘脑弓状核平面Ob?R免疫阳性胞体及纤维表达较对照组明显减弱（见图3、4），两组数据详见

7、表1。表1各组NPY、Ob?R阳性细胞及阳性纤维灰度值注：*与对照组比较，P＜0.053讨论随着现代生活水平的提高，肥胖的发生率逐年上升。因此，肥胖的发生机制一直是人们关注的热点，1994年Zhang等［1］首次从小鼠和人的脂肪组织中分离并克隆出肥胖基因（ob基因），ob基因编码的蛋白质为leptin，主要由脂肪组织产生，脂肪组织分泌的leptin入血后，通过脉络丛进入脑脊液，流入第三脑室，然后通过室管膜层转运至下丘脑与相应核团上的leptin受体（Ob?R）结合。leptin具有广泛的生物学效应，与肥胖的关系已引起共识

8、，其主要作用的部位为下丘脑，尤其是弓状核，通过与弓状核上的Ob?R结合来调节机体脂肪的多少。NPY作为中枢主要的促食欲肽，对leptin的调节起着重要作用［2］。已有实验证实，NPY神经元上有Ob?R分布［3］，提示NPY是介导leptin发挥作用的重要调质。研究发现，脑室内注射leptin可以明显下调NPYmRNA