大鼠血管内皮细胞表型转变在肺纤维化过程中的分子机制研究

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20121783医学硕士学位论文学位申请人：郭永庆指导教师：段斐教授学位类别：医学硕士学科专业：药理学授予单位：河北大学答辩日期：二○一六年十一月万方数据ClassifiedIndex:UniversityCode:10075U.D.C:NO:20121783ADissertationfortheDegreeofM.MedicineThemolecularmechanismofPhenotypicchangesofvascularendothelialcellsinratsduringthepulmonaryfibrosisCandid

2、ate：GuoYongqingSupervisor：Prof.DuanFeiAcademicDegreeApplied：MasterofmedicineSpeciality：PharmacologyUniversity：HebeiUniversityDateofOralExamination：Nov.2016万方数据万方数据万方数据摘要摘要目的：观察正常和肺纤维化大鼠肺血管内皮细胞表型转变，探讨肺纤维化发生过程中的EnMT的信号传导机制。方法：1.60只SD大鼠随机分为模型组和对照组，每组30只。模型组肺纤维化动物模型采用方法是气管内注射博莱霉素，对照组采用的方法是气管内注射

3、生理盐水，然后分别在7d、14d、28d每组随机取10只大鼠处死取材，最后对随机取材分别进行HE染色和Mssson染色，进而观察大鼠肺组织形态学的变化和I型胶原的表达情况。2.利用荧光定量PCR技术检查各种大鼠肺组织Smad3、α-SMA、Snail、E-cadherin及β-catenin的表达变化。3.分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞，分别进行Smad-siRNA干扰、β-catenin-siRNA干扰以及Notch1-siRNA干扰，RT-PCR检测钙粘附蛋白-E（E-cadherin）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I型胶原的mRNA表达情况，进而观察阻断不同信号分

4、子表达后该信号通路对EnMT的影响，以确定介导EnMT的关键信号通路。结果：1.HE染色结果:7d模型组大鼠两肺有水肿明显和多发性出血点、对照组无水肿和多发性出血点；14d模型组大鼠两肺有水肿减轻和出血点减少，对照组同7d组；28d模型组两肺体积减小，质硬，弹性差，肺组织表面凹凸不平，少量散在的出血点，斑点状实变病灶，对照组同7d组。2.Mssson染色结果：大量蓝绿色的纤维化组织存在于模型组大鼠肺组织，肺泡结构被破坏，间隔增厚，大量胶原沉积，肺组织发生实变。3.荧光定量RT-PCR技术检测结果：肺组织Smad3、α-SMA、Snail、E-cadherin及β-cateni

5、n的表达变化：与正常对照组比，给予博莱霉素后第7天、14天和28天肺组织中Smad3、α-SMA、Snai和β-catenin相对表达量均显著升高（P<0.05）；E-cadherin表达量显著下降（P<0.05）。4.Smad-siRNA、β-catenin-siRNA和Notch1-siRNA干扰结果结果：与单纯模型组对I万方数据摘要比，Smad-siRNA转染内皮细胞组、β-catenin-siRNA转染组、Notch1-siRNA转染组的α-SMA、I型胶原的表达明显下降，E-cadherin的表达明显升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：1.博来霉素可致大

6、鼠肺微血管内皮细胞形态改变及功能紊乱，肺微血管内皮细胞表型转变可能是博来霉素所致肺纤维化发生发展的重要环节。2.TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因表达上调，可能对博来霉素致大鼠肺纤维化有促进作用。关键词肺纤维化肺微血管内皮细胞博来霉素TGF-β/Smad通路Wnt/β-catenin通路II万方数据AbstractAbstractObjective:Theaimofthisprojectistoclarifytheeffectonendothelial-mesenchymaltransition(EnMT)duringthedevelopmentof

7、pulmonaryfibrosis,andstudythedetailofpulmonarymicrovascularendothelialcells.Therefore,wearegoingtodiscussthefunctionofsignalpathwayofEnMTduringpulmonaryfibrosis,andconfirmthecorrelationbetweendifferentsignalpathwayandEnMTwhilepulmonaryfibrosishappened.Th