肺微血管内皮细胞表型改变与博莱霉素所致大鼠肺纤维化的关系论文

《肺微血管内皮细胞表型改变与博莱霉素所致大鼠肺纤维化的关系论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、肺微血管内皮细胞表型改变与博莱霉素所致大鼠肺纤维化的关系论文【摘要】目的:观察博莱霉素所致肺纤维化大鼠微血管内皮细胞(LMVECs)超微结构及血清CTGF的变化，探讨肺微血管内皮细胞表型及与博莱霉素损伤肺纤维化间的关系.方法:SD大鼠45只，随机分为3组：博莱霉素（BLM）组，肺炎链球菌组及正常对照组，每组15只，分别气管滴注博莱霉素及肺炎链球菌造模，对照组滴注生理盐水.电镜观察外周肺组织内皮细胞超微结构，同时测定血清CTGF含量.结果:光镜及电镜显示肺炎组与BLM组的不同改变.肺炎组组织学及肺微血管内皮细胞超

2、微结构表现为典型的急性炎症损伤修复.freelonaryfibrosis,PF）的早期病理变化之一，而急性肺泡炎与肺微血管及内皮细胞形态和功能的变化密切相关.博莱霉素所诱发的PF的早期病理变化之一即为急性肺泡炎期.Beon等［1］证实，成纤维细胞过度增生和血管异常在硬皮病并发肺纤维化中起着重要作用，Magro等［2］的研究支持如下假设：微血管内皮损伤在人特发性肺纤维化的发生中其着一定作用.上述研究表明，肺纤维化与肺微血管内皮细胞的损伤关系密切.有关研究已经证实，结缔组织生长因子（connectivetissue

3、groycin,BLM）和肺炎链球菌分别建立肺纤维化和肺炎模型，通过对比观察肺微血管内皮细胞表型及其分泌的CTGF的变化，探讨肺微血管内皮细胞(lungmicrovasularendothelialcells,LMVECs)在博莱霉素所诱发的肺纤维化中的作用.1材料和方法1.1材料SD大鼠(第四军医大学实验动物中心）,体质量（150±20）g,雌雄不拘;注射用盐酸平阳霉素（天津太河制药）；JEM2000EX透射电镜（日本JEOL）；大鼠CTGF定量ELISA试剂盒（尚柏生物医学技术有限公司）.1.2方法1.2

4、.1动物模型的建立SD大鼠随机分为3组：BLM组、肺炎组、对照组，每组15只.BLM组：平阳霉素（8mg/支），用9g/L氯化钠稀释成4g/L,SD大鼠［体质量（150±20）g］，气管内滴入平阳霉素溶液0.15~0.2mL.肺炎组在相同条件下向气管内注入肺炎链球菌菌液0.15mL/只（中国药品生物制品检定所出品，细菌号31003，复苏繁殖2代，菌落数3×1011/L）.对照组在相同条件下向气管内注入等量生理盐水.1.2.2光镜形态学观察分别于干预后的第3，7，14，21和28d取各组大鼠肺组织.具体为大鼠麻醉

5、后开胸，于右心室注入生理盐水进行冲洗至肺发白后，取左右肺组织浸入40g/L多聚甲醛固定液固定24h，脱水后石蜡包埋.行苏木精伊红(HE)染色,光镜下观察其组织学特点，VanGieson(VG)氏苦味酸性复红染色观察各组胶原纤维分布情况.1.2.3硝酸镧心内灌注及电镜观察分别于3，7，14，21和28d取BLM组、肺炎组和对照组大鼠肺组织，大鼠麻醉后开胸，于左室流出道插入灌注针头，生理盐水200mL冲洗后用40g/L戊二醛二甲砷酸钠缓冲固定液（pH7.24～7.30）灌注固定.取外周肺组织修切成1mm3的小块，

6、4℃镧醛固定液2h，用含镧的0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液漂洗3次，10min/次，再用不含镧的10g/L四氧化锇后固定2h，经0.2mol/L二甲砷酸钠缓冲液冲洗后，梯度丙酮脱水，包埋，切片，固定后透射电镜观察.1.2.4大鼠血清CTGF测定分别于3，7，14，21和28d取各组大鼠外周血，离心（4000r/min，5min）后取上清液-70℃冰箱保存.采用ELISA法测定CTGF含量.统计学处理：计量结果以x±s表示，应用SPSS10.5软件，各组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）及LSDt检验，P

7、0.05为差异有统计学意义.2结果2.1光镜观察2.1.1HE染色对照组肺泡结构完整，肺泡壁无增厚（图1A）；肺炎组3d肺间质内见大量炎细胞，肺泡腔结构消失呈片状实变区（图1B）,7d肺泡间隔变薄，肺通气较前好转，14d后肺通气基本恢复正常，肺泡间隔可见少量胶原纤维；BLM组3d肺泡腔渗出性改变，肺泡间隔炎细胞浸润，可见变性、坏死的上皮脱落，7d肺组织实变明显（图2A），微小动脉内皮细胞增生,14~21d肺泡间隔增厚明显，实变区明显增多，间质微小血管周围大量嗜酸性粒细胞浸润及少量巨噬细胞(图2B)，间质成纤维细

8、胞增多（图2C），28d肺泡间隔增厚，可见大量胶原纤维.A：对照组肺泡结构完整，间质细胞排列整齐HE×100；B:肺炎组3d组肺间质内大量炎细胞浸润，有片状实变区HE×40.图1对照组及肺炎组HE染色A:7d组肺泡间隔增厚，有实变区;B:14d组间质实变明显，间质小血管周围大量中性粒细胞聚集;C:21d组肺间质内大量成纤维细胞.图2BLM组HE染色×1002.1.2VG染色对照组肺泡间