肺微血管内皮细胞表型改变与博莱霉素所致大鼠肺纤维

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1、肺微血管内皮细胞表型改变与博莱霉素所致大鼠肺纤维【摘要】目的:观察博莱霉素所致肺纤维化大鼠微血管内皮细胞(LMVECs)超微结构及血清CTGF的变化，探讨肺微血管内皮细胞表型及与博莱霉素损伤肺纤维化间的关系.方法:SD大鼠45只，随机分为3组：博莱霉素（BLM）组，肺炎链球菌组及正常对照组，每组15只，分别气管滴注博莱霉素及肺炎链球菌造模，对照组滴注生理盐水.电镜观察外周肺组织内皮细胞超微结构，同时测定血清CTGF含量.结果:光镜及电镜显示肺炎组与BLM组的不同改变.肺炎组组织学及肺微血管内皮细胞超微结构表现为典型的急性炎症损伤修复

2、，之后肺组织结构恢复正常.BLM组表现为肺组织损伤的持续进行，肺微血管内皮细胞7d开始增殖并出现形态学的改变，且贯穿实验各个阶段，最终胶原明显沉积于肺泡间隔.血清CTGF测定：肺炎组3d开始增高，第7d骤降至(5.04±0.82)ng/L，第21d恢复至(12.06±0.43)ng/L.BLM组全程增高，第7d至(12.53±2.36)ng/L,第21d增至高峰(19.45±0.41)ng/L.结论:肺微血管内皮细胞功能的转变及其分泌CTGF时相和量的异常可能是博莱霉素所致肺纤维化发生发展的重要环节.【关键词】博莱霉素肺纤维化内皮血

3、管表型结缔组织生长因子0引言急性肺泡炎是博莱霉素所诱发的肺纤维化（pulmonaryfibrosis,PF）的早期病理变化之一，而急性肺泡炎与肺微血管及内皮细胞形态和功能的变化密切相关.博莱霉素所诱发的PF的早期病理变化之一即为急性肺泡炎期.Beon等［1］证实，成纤维细胞过度增生和血管异常在硬皮病并发肺纤维化中起着重要作用，Magro等［2］的研究支持如下假设：微血管内皮损伤在人特发性肺纤维化的发生中其着一定作用.上述研究表明，肺纤维化与肺微血管内皮细胞的损伤关系密切.有关研究已经证实，结缔组织生长因子（connectivetis

4、suegroycin,BLM）和肺炎链球菌分别建立肺纤维化和肺炎模型，通过对比观察肺微血管内皮细胞表型及其分泌的CTGF的变化，探讨肺微血管内皮细胞(lungmicrovasularendothelialcells,LMVECs)在博莱霉素所诱发的肺纤维化中的作用.1材料和方法1.1材料SD大鼠(第四军医大学实验动物中心）,体质量（150±20）g,雌雄不拘;注射用盐酸平阳霉素（天津太河制药）；JEM2000EX透射电镜（日本JEOL）；大鼠CTGF定量ELISA试剂盒（尚柏生物医学技术有限公司）.1.2方法1.2.1动物模型的建

5、立SD大鼠随机分为3组：BLM组、肺炎组、对照组，每组15只.BLM组：平阳霉素（8mg/支），用9g/L氯化钠稀释成4g/L,SD大鼠［体质量（150±20）g］，气管内滴入平阳霉素溶液0.15~0.2mL.肺炎组在相同条件下向气管内注入肺炎链球菌菌液0.15mL/只（中国药品生物制品检定所出品，细菌号31003，复苏繁殖2代，菌落数3×1011/L）.对照组在相同条件下向气管内注入等量生理盐水.1.2.2光镜形态学观察分别于干预后的第3，7，14，21和28d取各组大鼠肺组织.具体为大鼠麻醉后开胸，于右心室注入生理盐水进行冲洗至

6、肺发白后，取左右肺组织浸入40g/L多聚甲醛固定液固定24h，脱水后石蜡包埋.行苏木精伊红(HE)染色,光镜下观察其组织学特点，VanGieson(VG)氏苦味酸性复红染色观察各组胶原纤维分布情况.1.2.3硝酸镧心内灌注及电镜观察分别于3，7，14，21和28d取BLM组、肺炎组和对照组大鼠肺组织，大鼠麻醉后开胸，于左室流出道插入灌注针头，生理盐水200mL冲洗后用40g/L戊二醛二甲砷酸钠缓冲固定液（pH7.24～7.30）灌注固定.取外周肺组织修切成1mm3的小块，4℃镧醛固定液2h，用含镧的0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液

7、漂洗3次，10min/次，再用不含镧的10g/L四氧化锇后固定2h，经0.2mol/L二甲砷酸钠缓冲液冲洗后，梯度丙酮脱水，包埋，切片，固定后透射电镜观察.1.2.4大鼠血清CTGF测定分别于3，7，14，21和28d取各组大鼠外周血，离心（4000r/min，5min）后取上清液-70℃冰箱保存.采用ELISA法测定CTGF含量.统计学处理：计量结果以x±s表示，应用SPSS10.5软件，各组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）及LSDt检验，P<0.05为差异有统计学意义.2结果2.1光镜观察2.1.1HE染色对照组肺

8、泡结构完整，肺泡壁无增厚（图1A）；肺炎组3d肺间质内见大量炎细胞，肺泡腔结构消失呈片状实变区（图1B）,7d肺泡间隔变薄，肺通气较前好转，14d后肺通气基本恢复正常，肺泡间隔可见少量胶原纤维；BLM组3d肺泡腔渗出性改变，肺泡间隔炎