端脑腹侧的胆碱能前体细胞的胚胎来源

《端脑腹侧的胆碱能前体细胞的胚胎来源》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、端脑腹侧的胆碱能前体细胞的胚胎来源【摘要】　　目的为探索胆碱能神经元的胚胎来源，验证放射状胶质细胞是否表达乙酰胆碱转移酶。方法通过对孕14天（E14）大鼠胚胎端脑冠状石蜡切片进行波形蛋白（放射状胶质细胞标志性蛋白，vimentin）和乙酰胆碱转移酶(胆碱能神经元的标志性蛋白ChAT)双重荧光免疫组织化学染色，并通过重叠同一视野内的荧光双染的图片来精确地体现放射状胶质细胞表达ChAT的位置。结果E14大鼠端脑腹侧脑室区有部分组织呈vimentin/ChAT免疫化学双染阳性，这和资料中证实的胆碱能神经元E14天出现于第三脑室的

2、腹背侧部的结论是一致的。结论E14大鼠端脑内的放射状胶质细胞表达ChAT。表明放射状胶质细胞具有神经干细胞性质，它不断地进行不对称分裂，产生胆碱能表型的成神经细胞，即胆碱能前体细胞。【关键词】胆碱能神经元；放射状胶质细胞；乙酰胆碱转移酶；波形蛋白　　Abstract:ObjectiveToexploretheembryonicsourceofcholinergicneuronsandtoverifybryonic14days(E14)munohistochemicalstainingofvimentin(aprotEinm

3、arkerofradialglialcell)andcholineacetyltransferase(ChAT,aprotEInmarkerofcholinergicneuron)totestefieldofvisionreflectedtheprecisepositionentin-positivecellscoexpressedChATinventralganglioniceminenceinE14rats,ergedinthedorsalorventralsideofthethirdventricleontheE14

4、day.ConclusionIntheE14rattelencephalbrainChATcellsandcontinuallyundermetricalcelldivisiontogenerateneuronblastsentin　　胆碱能神经元是重要的功能神经元，广泛分布于中枢神经系统的脊髓、脑干、大脑皮质及基底神经核内。生物体的多种生理活动均有胆碱能神经元的参与，如学习和记忆、觉醒和睡眠、体温调节、摄食和饮水、感觉和运动、心血管活动的调节等［1］。因此，人体内的多种行为功能紊乱均涉及到胆碱能系统的功能失衡或病变。要彻

5、底攻克这些相关疾病，首先要认识和了解胆碱能神经元的胚胎来源、发生机制等问题，只有了解了体内胆碱能神经元的发生、发育规律，才能有机会找到治疗此类疾病的有效途径。尽管目前对分布在大脑内的胆碱能神经元的时空定位已经明确，但是，对它们的来源仍然不清楚。有资料证实，在神经元发生期（大鼠为E12～18），脑室区内96％～98%的细胞均为放射状胶质细胞，可是放射状胶质细胞怎么会表达乙酰胆碱转移酶(ChAT)呢？以前的观点认为，放射状胶质细胞产生成神经细胞后，成神经细胞沿着其突起迁移，到达目的地方能表达其功能神经元表型［2-4］。我们推测

6、端脑脑室区表达ChAT的有丝分裂细胞可能就是放射状胶质细胞，端脑中的胆碱能神经元可能来源于脑室区放射状胶质细胞。因此，我们拟通过E14大鼠端脑冠状切片观察放射状胶质细胞是否表达胆碱能神经元的标志性蛋白ChAT，为端脑胆碱能神经元可能来源于脑室区放射状胶质细胞这一判断寻找实验证据。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1试剂和主要仪器　　兔抗大鼠ChAT抗体（多克隆），武汉博士德公司；小鼠抗大鼠波形蛋白（vimentin）抗体（单克隆），BioGenex；免疫组化SP染色试剂盒，福州迈新公司；TRITC-anti-rab

7、bitIgG，北京中山试剂公司；FITC-anti-mouseIgG，北京中山试剂公司；YL3A型回转式石蜡切片机，德国Leika；病理组织漂烘处理仪，江苏常州中德电子仪器厂；荧光显微镜，日本Olympus。　　1.1.2实验动物　　雌性健康，置于60℃烤箱5h。将切片脱蜡和水化，0.01％胰蛋白酶修复抗原，37℃，30min；0.3%TritonX-100孵育RT20min；非免疫山羊血清封闭，RT，30min；vimentin抗体与ChAT抗体混合稀释（两抗体效价均为1∶200），滴加2种混合一抗，4℃过夜孵育；加入F

8、ITC-anti-mouseIgG（1∶100），RT，45min；滴加TRITC-anti-rabbitIgG（1∶100），RT，45min；除山羊血清封闭后无需漂洗外，以上每一步骤后均需0.01mol/LPBS充分漂洗；最后防荧光淬灭封片剂封片，荧光显微镜下观察，并拍照。　　2结果　　2.1端脑冠