利用ssr和rapd技术构建柑桔分子遗传图谱论文

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1、西南大学硕f’学位论文摘要利用SSR和RAPD技术构建柑桔分子遗传图谱硕士研究生：鲁玉洋指导教师：陈善春研究员摘要柑桔是世界上最重要的果树树种之一：目前全世界栽培柑桔约1亿亩，年产1．1亿吨以上，年贸易额约80亿美元，为全球第四火贸易农产晶。我国柑桔业近几十年来得到了迅猛发展，柑桔已成为我国南方晟大宗的果树树种，栽培面积达2400多万亩(居世界首位)。产量近1500万吨(世界第二：位)，若以每吨柑桔鲜果产值1000元计，2004年全国柑桔产值高达150亿元以上。柑桔业已成为我国南方广大山区、贫困区和三峡库区农村经济的支柱产业之一，在社会主义

2、新农村建设、农民脱贫致富彝小康、山区水七保持和三峡库区移民安置中发挥了重要作用。晶种的实时更新换代是各种产业可持续稳定发展的基础，我国柑桔产业的发展也不例外。特别是加入WTO后，面对激烈的国际市场竞争，我国进行大规模的柑桔品种更新抉代和结构调整显得尤为迫切。但迄今为止，我国自主培育的优新柑桔品种很少，加之受到知识产权的限制，目前可以利用的品种远不能满足品种更新换代的需求，因此培育具有自主知识产权和适应市场需要的柑桔优良新品种对我国柑桔产业发展具有重要意义。然而，柑桔常规育种效率低，育种进程缓暖，短期内难以培育获得优良新品种。近年来蓬勃发展的

3、植物分子育种技术为柑桔业提供了一条全新、高效的育种途径。利用分子生物学技术和手段，针对柑桔育种中的重要性状和重要问题，深入开展基因的遗传、定位、克隆和调控机理等研究，通过分子标记辅助育种(MAS)和基囡工程等方法进行柑桔重要性状的定向改良，创造新的品种类型，将人人提高柑桔育种效率，加快育种进程。分子遗传图谱的构建是植物基因组研究的重要内容之一，拦分子育种研究的重要基础。高密度的分子遗传图谱已有效地应用丁

4、基因定位、图位克隆基因、重要农艺性状QTL定位、分子标记辅助育种(MAs怫1比较基因组学等研究中。因此，对具有重要经济价值和迫切的育种需求

5、的柑桔类果树来说，构建分子遗传图谱具有重要意义．本研究以清见桔橙(ereticulata×Csinensis)(母本)与强德勒柚(cgrandisOsb)(父本)的F1代102株为作圈材料，利用SSR；}IIRAPD两种标记，甩绕柑桔分子遗传图谱的构建，进行了柑桔基因组DNA提取方法的改进、适用丁柑桔的ssR标记体系的建立以及SSR{．ttRAPD标记的分离分析等方面研究，并最终构建了柑桔分子遗传图谱。主要结果如F：1、适合SSR分析和RAPD分析的柑桔基因组DNA提取方法在CTAB溶液中加入抗氧化剂1％PVP}110．2％B．巯基乙醇，提

6、取的DNA粗提物晕无色透明I状，没有褐化现象。用不同生睦期的材料提取柑桔捌．DNA，幼¨I提取的基因尘HDNA质量最好，得率最高。2、适合遗传图谱构建的SSR标记技术的建立通过优化PCR反麻的复性温度和反应体系等参数，筛选多态性丰富的ssR引物，建点r适合构建柑桔遗传蚓谱的ssR分析技术：柑桔ssR分析

7、JP≈PCR反戍体系以20¨L为宜．含10xBuffIer2，OttL，25mMMgCl21．6p_L，25mMdNTPl．69tl。，15nedrtlPrimer各I．O[tL，5U／I．tLTaq聚合酶02¨L，襁扳DNA(50ng／1

8、．tL)1．OpL：再引物复性温度怫度试验结果表明，所筛选fttJ28对ssR引物的最仕复性温度在54℃到58℃之间。从75对ssR引物中筛选获得在双亲间存在多态悱的引物28对，多态性比例为37．33％，这些引物适台_

9、_Ijr构建柑桔遗传图谱的SSR分析。3、作图群体SSR分析用筛选出的28对引物对F-群体进行'SSR分析，兆获得稳定、至少可重复1次的多态性带删59条，jF均每对引物可产生2．1条多态性条带。经}玎测验，获得的59个SSR多态性位点中，有34个位点符合孟德尔分离比例(1：I)，可州’r构建分子遗传浏谱：其余25个位点因不符

10、合蔷德尔分离比例而不能州于作图。4、作图群体RAPD分析从20个RAPD随机引物中筛选获得在双亲间存盘多态性的引物8个，多态性比例为40％。州筛选出的8个随机引物对Fl群体进行多态性分忻，共获得稳定、至少可重复1次的多态性带刑21个，平均每个引物可产，f2．64条多态性条带。经p方测验，获得的21个RAPD多态性俄点中，有11个位点符合孟德尔分离比例(1：1)，呵刚r作图；其余10个位点因不符合需德尔分离比例而不能用于作幽。5、柑桔分子遗传图谱的构建利删SSR{rlRAPD标记构建了一张包含11个连锁群，由45个标记位点组成的柑桔(2n=l

11、8)分f遗传图谱，其中包括34个SSR标记，11个RAPD标l己，图谱总长：度402cM，标记间平均距离为8．93cM。连锁群上的标记数在2～7个之间．连锁耕艮度变动在6cM～7