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《钒化钠对人食管癌细胞系ec109 erk1-2胞内信号转导的影响-》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、钒化钠对人食管癌细胞系EC109ERK1/2胞内信号转导的影响*【关键词】钒化钠;食管癌;信号转导;ERK1/2 AbstractObjective:ToevaluatetheeffectofsodiumvanadateontheexpressionofERK1/2intheesophagealcancercelllineEC109.Methods:CF7细胞凋亡抑制其增殖，显示了钒化钠作为有效的化疗制剂的潜能。我们前期研究显示，一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109细胞株的生长，钒化钠
2、的抗肿瘤机制可能与cyclinD1蛋白表达降低有关[3]。本研究进一步揭示钒化钠抗肿瘤作用的分子机制，扩大其抗肿瘤谱，为钒化钠进一步发展成一种新型的抗肿瘤药物提供理论依据。 1材料与方法 1.1药品及抗体钒化钠购买于北京化学试剂公司，纯度为分析纯。RPMI1640培养基购自Gibco公司。胎牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司。二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠、丙烯酰胺等化学试剂购自Sigma公司。BCA蛋白分析试剂盒购自PIERCE公司。抗actin兔多克隆抗体、抗ERK1/2兔多克隆抗体、辣根酶标
3、记的山羊抗兔IgG均购自SantaCruze公司。ECL反应试剂盒购自PIERCE公司。 1.2细胞株人食管癌细胞系EC109购于中国科学院上海生科院细胞资源中心。食管癌细胞系EC109在37℃、饱和湿度及5%CO2条件下，用培养瓶在含10%胎牛血清、1×105U/L青链霉素的RPMI1640培养液中传代培养。 1.3免疫蛋白印迹实验(SF细胞裂解液在冰上裂解细胞，低温离心15min提取蛋白，BCA法蛋白定量。加上样缓冲液，100℃变性5min。每孔50μg蛋白上样，10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶
4、电泳。将蛋白电转到硝酸纤维膜上,用5%脱脂奶粉封闭1h，加一抗稀释液(1∶1000稀释)4℃过夜，TTBS洗膜，结合辣根过氧化物酶标记二抗(1∶5000稀释),TTBS洗膜，用ECL化学发光试剂在X光胶片上曝光、显影、定影。以actin为内参照，应用凝胶成像分析系统进行条带扫描分析结果，结果以蛋白条带的面积积分值与actin的面积积分值比值表示。实验重复3次。 1.4统计学处理采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析,统计数据以均数±标准差(x±s)表示,P<0.05为差异有统计学
5、意义。 2结果 实验结果显示,在50.0～200.0μmol/L的浓度范围内随着药物浓度的增加,药物处理时间的延长,ERK1/2蛋白表达量呈现逐渐下降的趋势。见图1，表1。表1ERK1/2蛋白表达的灰度测定比值 ERK1/2信号转导通路是近年来研究的热点，它是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转导系统，在细胞增殖过程中起重要调节作用[7]。研究表明，作为重要的细胞周期相关蛋白激酶途径，ERK1/2信号途径受到抑制是多种细胞凋亡的一个重要原因，这主要是因为ERK1/2激酶与Bcl-2家族蛋白有
6、着密切的关系，ERK1/2的激活不但可以上调Bcl-2等抗凋亡蛋白的表达，而且可以诱导其活化[8-9]。实验观察了钒化钠对食管癌细胞株EC109细胞ERK1/2表达的影响。研究发现在一定的作用时间范围内，低浓度钒化钠组对ERK1/2蛋白表达无影响，而高浓度钒化钠可下调食管癌细胞株EC109细胞中ERK1/2蛋白的表达，这一变化趋势与MTT的结果基本一致[3]。提示钒化钠可能通过抑制ERK1/2蛋白的表达进而发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用，这一结果为钒化钠防治食管癌的临床应用奠定理论基础。由于细胞凋亡是一
7、个极其复杂、涉及多步骤、多因子参与的过程,故钒化钠诱导肿瘤细胞凋亡的详细机制仍需进一步研究。【参考文献】 [1]HeyligerCE,TahilianiAG,McNeillJH.Effectsofvanadateonelevatesglucoseanddepressedcardiacperformanceofdiabeticrats[J].Science,1985,(227):1474-1477. [2]RayRS,RanaB,SiB,etal.Vanadiummediatedapoptosis
8、andcellcyclearrestinMCF-7cellline[J].Chemico-biologicalInteractions,2006,(163):239-247. [3]吕军，姜树源，邵国,等.钒化钠对食管癌细胞系EC109Caspase-3表达的影响[J].包头医学院学报,2008,24(3):221-223. [4]GoldfineAB,SimonsonDC,FolliF,etal.Invivoandinvitrostudiesofvanadate
