姜黄素对人食管癌ec109细胞作用的体外实验的研究

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1、．气7：I＼l●扣——1目录··············-·-·-·················································································l····································································································4姜黄素对人食管癌Ee．109细胞作用的体外实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·9与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·11⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·20⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·23⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·39·······························-····································································44⋯··⋯··························⋯⋯··⋯··························⋯·····

3、················⋯··48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·49综述姜黄素对肿瘤细胞作用的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”60们所摄取的食物中既有促癌成分也有抗癌成分，因此寻找食品级的抗癌成分进行食管癌的预防与治疗具有十分重要的意义。目前，对于食管癌患者I临床上主要采用手术治疗、放疗和化疗。细胞毒药物治疗仍有极其重要的作用，但化疗药物疗效有限且肾毒性和免疫抑制常使患者生活质量严重降低，患者

4、术后应该应用一些性质较温和的具有抗癌作用又能提高免疫功能的药物。目前，较多学者主要着眼于从天然产物中寻找新的化学药物。植物化学物为植物性食物中天然存在的，含量较少的一类具有抗突变、抗癌或其他生物活性的化学物质。近年来对植物化学物的研究已成为食品化学或营养学在抗肿瘤方面研究的热点。姜黄素(curcumin)是从多年生草本植物姜黄的根茎中提取的一种酚类色素，具有广泛的药理作用，如消炎、抗肿瘤、抗氧化、抗凝、抗动脉粥样硬化和降血脂。研究表明，姜黄素对于多种肿瘤细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用。最近美国NCI已将姜黄素列为第三代防癌药进行临床研究。本课题拟在前期研究的基础上，以人食

5、管癌细胞株Ec．109细胞作为研究对象，利用形态学、生化及分子生物学技术，旨在探讨姜黄素对Ec．109细胞的体外增殖抑制和诱导凋亡效应及其分子机制，以期为食管癌的干预阻断与防治提供新的线索和途径。中文摘要方法：1．常规培养人食管癌Ec．109细胞株，测定并绘制该细胞株的生长曲线，取得细胞进入对数生长期的准确时间和基本生长状况。2应用光学显微镜观察细胞形态学变化：将配置的不同浓度的姜黄素溶液作用于Ec．109细胞，在倒置相差显微镜下定时观察细胞的生长情况并爬片、照相。3采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定姜黄素对Ec．109细胞的生长抑制作用：用不同浓度姜黄素作用Ec．109细胞

6、不同时间，计算细胞增殖抑制率。4应用吉姆萨染色法观察不同浓度姜黄素作用不同时间后Ec．109细胞形态的改变。5采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布：收集经不同浓度姜黄素作用20h、40h、60h的Ec．109细胞及对照组细胞，流式细胞仪上机检测，应用软件进行分析。6应用免疫细胞化学方法观察Fas、PCNA、细胞周期素cyclinD1蛋白表达的变化。7所有实验数据采用SPSS13．0forwindows统计软件分析处理。多组间的比较采用单因素方差分析，组内两两比较用g检验。P<0．05差异具有显著性。结果：姜黄素对Ec．109细胞的体外生物学作用l经20、40、8

7、0lamol／L姜黄素处理的Ec．109细胞20h、40h和60h后，倒置相差显微镜下观察，与对照组相比，用药组细胞数量明显减少，部分细胞体积缩小，胞浆胞核浓缩，胞浆内颗粒增多增粗，核浆比例增高，多数细胞变形呈梭形改变，部分细胞变圆并悬浮于培养基中。提示Ec．109细胞生长受到抑制并随时间延长而趋向凋亡甚至毒性改变。2分别用姜黄素(o、20、40、80umol／L)作用于Ee．109细胞20、40h、60h后，MTF结果显示姜黄素能明显抑制EC．109细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖性。分别作用20h、4