双氢青蒿素对人食管癌细胞te-13的体外作用及其机制的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文双氢青蒿素对人食管癌细胞TE--13的体外作用及其机制的实验研究姓名：刘晓君申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：王玉华201203中文摘要双氢青蒿素对人食管癌细胞TE．13的体外作用及其机制的的实验研究摘要目的：食管癌(esophagealcancer，EC)是人类常见的消化道恶性肿瘤之一，我国属于食管癌病发率较高的国家，近年来其发病率和病死率均逐年增高。目前食管癌的主要治疗模式是包括手术、化疗、放疗及生物治疗为主的综合治疗。因为该病早期症状不明显，缺乏特异性的表现，容易为忽视，很多患者确诊时已经属于中晚期，预后很差。因而寻求一种有效的治疗方法，对于改善食管

2、癌患者的生活质量及延长生存时间有着十分重要的意义。近年来，国内外很多学者通过体内外实验研究发现青蒿素的衍生物双氢青蒿素(DHAdihydroartemisinin)具有显著的抗肿瘤作用，并且具备传统化疗药物治疗并不具备的一些优良的特点，因此作为一种具有广阔发展前景的抗癌治疗药物，日益引起广大学者的广泛关注，但目前国内外有关DHA对人食管癌的影响的文献报道较少见。本实验通过体外实验研究DHA对人食管癌细胞株TE．13的增殖抑制作用和对细胞周期和凋亡以及Survivin、Caspase．3蛋白表达的影响，进一步探讨DHA对人食管癌细胞株TE．13细胞的作用及其相关机制，从而为食管癌的中医中

3、药治疗提供相应的理论依据。方法：1细胞培养后，应用普通光学显微镜观察DHA作用于人食管癌细胞株TE．13后细胞的形态学变化。2不同浓度的DHA作用于人食管癌TE-13细胞后，应用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,MTT)比色法测定细胞光密度值(opticaldensity,OD)，计算生长抑制率，研究DHA对人食管癌细胞株TE-13细胞增殖的影响。3应用流式细胞仪技术(flowcytometry，FCM)研究DHA对人食管癌细胞株TE．13凋亡率的影响。4应用流式细胞技术检测DHA对人食管癌细胞TE．13细胞周期分布影响口中文摘要5应用免疫细胞化学(

4、immunocytochemistry，ic)方法定性检测DHA作用于人食管癌细胞1E．13后，凋亡相关基因Survivin、Caspase-3蛋白的表达变化。结果：1DHA对TE．13细胞形态的影响普通光学显微镜下观察未经药物处理的TE．13细胞贴壁生长，分布均匀，形态呈菱形或多边形，大小一致，细胞透明，形态饱满，胞体折光性好。而经过DHA处理48h后的实验组细胞形态发生明显的变化，细胞数目减少，体积缩小，细胞胞浆中出现空泡，细胞核固缩，脱落细胞数量明显增加，胞体折光性减弱。2DHA对TE．13细胞增殖的抑制作用MTr比色法显示，不同浓度DHA对TE．13细胞有明显的体外增殖抑制作用

5、。给予不同浓度的DHA(10、20、40、80、160pmol／1)处理TE．13细胞24h、48h、72h显示，各加药组OD值均有不同程度下降，抑制率呈不同程度的升高，与对照组相比，差异具有统计学意义(p

6、A浓度增大呈明显的升高趋势，低、中、高剂量加药组的凋亡百分率分别为：8．643Y挂-0．126％、18．606％：t：0．776％、29．026％：t：0．730％，统计后提示各处理组较对照组有显著性统计学意义(p

7、统计学意义(P<0．05)。中文摘要5免疫细胞化学检测DHA对TE．13细胞Survivin、Caspase．3蛋白表达的影响。免疫组化结果提示，DHA可以使Survivin表达减弱，Caspase．3蛋白表达升高。不同浓度DHA(40、80、160pmol／L)作用后，经阳性细胞百分比以及阳性细胞染色程度两方面分析，加药组Survivin蛋白表达值(ins值)随药物浓度增加，逐渐降低，各加药组和对照组相比有显著性差异Q<0．01)。加药组Ca