双氢青蒿素对人喉癌细胞hep

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1、双氢青蒿素对人喉癌细胞HeP作者：孟宇，李焰，刘斌，吴军正　【Abstract】AIM：ToobservethegroisininonHeP2cellsofthroatcancer.METHODS:CellproliferationisininisinininhibitedtheproliferationofHep2inatimeanddosedependentmanner.TheIC50ofthedrugagainstthecellsisinininhibitsthegros;cells;artemisinin;laryngealne

2、oplasms　　【摘要】目的：双氢青蒿素作用于人喉癌细胞（HeP2），观察药物对其生长抑制作用.方法：采用细胞计数法、MTT法、软琼脂克隆形成试验等观察、测定双氢青蒿素对喉癌细胞（HeP2）的细胞增殖率、细胞群体倍增时间、双氢青蒿素对HeP2细胞生长抑制作用的剂量－效应曲线、时间－效应曲线以及对该细胞克隆形成率的影响.结果：①细胞生长曲线显示该细胞增殖活跃，生长稳定，细胞群体倍增时间为247h；②双氢青蒿素对Hep2细胞有明显的生长抑制作用,其作用特点呈浓度依赖性，其IC50值为446684μg/L.时间－效应曲线显示：当作用时间在2

3、4~120h时，呈剂量依赖性关系及时间依赖性关系.③双氢青蒿素药物浓度分别为320、1000、3200、10000μg/L时，克隆形成率分别为1150、09、06和05（％）.结论：双氢青蒿素对HeP2细胞增殖及其生长有显著的抑制作用，随着药物作用时间的延长，对于细胞的生长抑制作用逐渐增强，表明双氢青蒿素在喉癌的化学治疗中对肿瘤细胞有直接的细胞毒作用.　　【关键词】肿瘤；细胞；青蒿素；喉肿瘤　　0引言　　肿瘤的形成是一个多因素、多阶段、长期作用的过程，恶性肿瘤的形成是细胞生长与增殖的调控发生严重紊乱且复杂的过程.有资料表明，青蒿素及其衍

4、生物对鼠艾氏腹水瘤细胞和人Hela细胞有细胞毒活性.用青蒿琥酯处理的HepG细胞可见梯状DNA和凋亡小体［1］.本实验将双氢青蒿素作用于HeP2细胞，观察对其生长抑制作用，旨在探讨抗肿瘤侵袭及肿瘤治疗方面为临床用药的筛选奠定一定实验基础.　　1材料和方法　　11细胞来源HeP2细胞系由第四军医大学秦都口腔医学院口腔生物学教研室提供.细胞培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中，体积分数为50mL/LCO2，37℃，饱和湿度条件下常规培养.　　12主要实验仪器、试剂双氢青蒿素纯品（分析纯）由北京科泰新技术公司方辉药业有限公

5、司提供,生理盐水稀释；MTT为Sigma公司产品；RPMI1640培养液、胰蛋白酶为Gibco产品.　　13细胞增殖率测定取对数生长期HeP2细胞，常规消化后接种于24孔培养板，接种浓度为1×107个/L，计数法测定细胞增殖情况，实验重复3次,取平均值作图并计算细胞群体倍增时间.细胞群体倍增时间（DT）计算公式:DT(h)=t×lg2/(LgNt-lgNo)t代表细胞处于对数生长期的培养时间，No及Nt分别代表对数生长期的起始和终止的细胞数.　　14双氢青蒿素对HeP2细胞生长抑制作用的剂量－效应曲线取对数生长期细胞，常规消化后以1×1

6、06个/L浓度接种于96孔培养板，24h后细胞贴壁.加入浓度为100～32000μg/L的6个浓度的双氢青蒿素，对照组加入不含药物的等体积RPMI1640培养液，每组分别设5个平行孔.常规培养5d，MTT比色法测定每组A490nm值.实验重复3次，取均值作图.以药物剂量的对数为横坐标，细胞存活率为纵坐标，绘制剂量－效应曲线、时间效应曲线计算IC50值.　　15双氢青蒿素对HeP2细胞生长抑制作用的时间－效应曲线接种细胞与实验加药分组同14.分别于药物作用1、2、3、4、5d后，MTT比色法测定每组A490nm值.实验重复3次，取均值，绘

7、制时间－效应曲线并计算IC50值.　　16软琼脂克隆形成试验采用双层琼脂培养法在24孔板中进行，底层含5mL/L琼脂，每孔1mL，4℃凝固.对照组加入等体积RPMI1640培养液.每组分别设4个平行孔.实验组双氢青蒿素药物浓度分别为320、1000、3200、10000、32000μg/L.常规培养2.　　17数据处理与分析细胞生长存活率（%）=实验组光吸收值÷对照组光吸收值×100%.IC50定义为使实验组光吸收值下降至对照组的50%时的药物浓度，应用MicrosoftEXCEL软件绘制剂量－效应曲线，作图法计算双氢青蒿素对Hep2细

8、胞的IC50值.　　2结果　　21HeP2细胞生长曲线细胞生长曲线显示该细胞增殖活跃，生长稳定（Fig1），细胞群体倍增时间为247h，表明该细胞适合在观察生长变化的实验中应用.　　22双氢青蒿素对Hep2