叶黄素对人食管癌ec109细胞作用的体外实验的研究

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1、1lI目录IIIIqlIlllIILIIlUIIIIlIIIllUllIIllllllllLIIIIIIII)11Y1901713中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文叶黄素对人食管癌Ec．109细胞作用的体外实验研究前言⋯．-．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9日U吾⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯j⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯l9多口才C⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46综述叶黄素对肿瘤细胞作用的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯54中文摘要叶黄素对人食管癌Ee．109细胞作用的体外实验研究摘要目的：食管癌(esophagealcancer，Ec)是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，主要有鳞癌和腺癌两种病理类型，在我国以鳞癌多见。全世界每年约有22万人死于食道癌，我国是食道癌高发区。食道癌死亡者仅次于胃癌居第四位，其主要诱因是不良饮食习惯及亚硝胺慢性刺激、炎症与创伤，遗传因素以及饮水、粮食和蔬菜中的微量元素含量有关。已有研究证明人们所摄取的食物中既含有抗癌成分也有促癌成分，所以寻找食品级的抗癌成分用以食管癌的预防与治疗具有十分重

4、要的意义。现阶段，食管癌患者的治疗手段主要是手术治疗、放疗和化疗。细胞毒药物治疗有非常重要的作用，但化疗药物疗效有限，并且其肾毒性和免疫抑制作用常使患者生活质量严重下降，建议患者术后用一些性质较温和的具有抗癌作用同时能提高免疫功能的药物。叶黄素(1utein)是一种天然植物提取物，自然界广泛存在的类胡萝b素，可以提高人体的免疫能力，也是一种抗氧化剂，对老年视黄斑退行性变化有很好的预防作用，有研究表明，叶黄素对一些类型的癌症具有预防效果。国外大量的流行病学数据显示，叶黄素在阻断肿瘤、心血管疾病的发生与发展、预防视黄斑退化和增强机体免疫力等方面都有

5、着广泛的生物学活性。目前我国叶黄素的应用仅仅局限于饲料行业，食品和医药行业未充分重视对其生物学活性和生物学效应的研究。国内学者王明臣等研究显示叶黄素具有明显的抗氧化、抗衰老以及抗突变等生物学效应。目前癌症的治疗，西医主要采取手术、放疗、化疗、免疫疗法、而中医疗法即可与其配合，也可单独使用。鉴于中医这种优势该课题拟在前期研究的基础上，利用生化及分子生物学技术，以人食管癌细胞株Ec．109细胞作为研究对象，探讨叶黄素对Ec．109细胞的增殖抑制和诱导分化效应及其分子机制，以期为食管癌的干预阻断与防治提供新的线索和途径。中医治疗扶正固本，改善患者的饮

6、食睡眠情况，提高自身的免疫功能，增强患者的体质，那么对防止癌症的复发和转移将会大有益处。方法：中文摘要l按要求常规培养人食管癌Ec．109细胞株，测定并绘制该细胞株的生长曲线，获得细胞进入对数生长期的准确时间和基本生长状况。2应用光学显微镜观察细胞的形态学变化：将配置的不同浓度的叶黄素溶液作用于Ec．109细胞，在倒置相差显微镜下定时观察细胞的生长情况并爬片、照相。3采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定叶黄素对Ec．109细胞的生长抑制作用：并计算细胞增殖抑制率。．4应用吉姆萨染色法观察不同浓度叶黄素作用不同时间后Ec．109细胞形态的改变。。5

7、采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布：收集经不同浓度叶黄素作用24h、48h、72h的Ec．109细胞及对照组细胞，流式细胞仪上机检测，应用软件进行分析。6应用免疫细胞化学方法观察Fas、PCNA、细胞周期素cyclinA蛋白表达的变化。7采用透射电镜观察不同浓度叶黄素作用不同时间后Ec．109细胞的超微结构改变。8所有实验数据采用SPSS13．0forwindows统计软件分析处理。多组间的比较采用单因素方差分析，组内两两比较用g检验。P<0．05差异具有统计学意义。结果：叶黄素对Ec．109细胞的体外生物学作用1加入40、80

8、、1601xmol／L不同浓度叶黄素处理的Ec．109细胞24h、48h和72h后，倒置相差显微镜下观察，与对照组相比较，用药组细胞数量明显减少，部分