缬沙坦对糖尿病大鼠心肌血小板源生长因子b的表达

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1、缬沙坦对糖尿病大鼠心肌血小板源生长因子B的表达【摘要】目的探讨缬沙坦对糖尿病(DM)大鼠心肌血小板源生长因子B（PDGFB）表达及心肌纤维化的影响。方法32只大鼠分为对照组、DM未治疗组、缬沙坦小剂量治疗组（10mg·kg-1·d-1）、缬沙坦大剂量治疗组（30mg·kg-1·d1）；12RNA表达情况。结果DM未治疗组H/B、LVMI增高(P＜0.01)；PDGFB、FN和ColⅢmRNA表达显著上调；缬沙坦干预12RNA的表达减少，心肌间质CVF降低（均P<0.01）；大小剂量治疗组可

2、以减少DM心肌PDGFBmRNA的表达（P<0.01）。以上效应具有剂量依赖性。结论DM大鼠心肌PDGFB表达明显上调。缬沙坦能减少DM大鼠心肌细胞外基质(ECM)积聚，改善心肌结构，PDGFB表达下调可能是缬沙坦抑制DM心肌纤维化的心脏保护作用机制之一。【关键词】缬沙坦；糖尿病；大鼠；心肌病变；血小板源生长因子B　　1福建医科大学附属第一医院内分泌科心肌纤维化是糖尿病心肌病(DC)重要的病理改变，是糖尿病(DM)心脏舒张功能障碍进而发生充血性心力衰竭的主要原因之一〔1〕。血小板源生长因子

3、B（PDGFB）是一种刺激结缔组织增生的肽类调节因子，其在DM并发症的发病机制中发挥重要作用而倍受关注。血管紧张素Ⅱ受体1（AT1受体）拮抗剂(ARB)可通过选择性地阻断血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）与AT1受体结合,延缓DM肾脏纤维化的进展，并能阻止或逆转高血压性心脏病及心肌梗死后的心肌重塑，其作用得益于ARB降压以外的保护作用。关于ARB在DM中的心脏保护作用及其机制的研究方兴未艾。本研究观察缬沙坦干预对DM大鼠心肌PDGFB表达以及细胞外基质（ECM）含量、心肌纤维化的影响，以期为防治DC提出新的思路

4、。　　1材料与方法　　1.1DM大鼠模型的建立和分组　　选择8周龄体重220～250g雄性SD大鼠（上海斯莱克实验动物有限公司提供）32只，随机分成正常对照组（N）8只，DM组24只，采用一次性腹腔内注射1%链脲佐菌素（STZ,Sigma公司，55mg/kg），72h后尾静脉采血用血糖仪（Roche公司）测定血糖，≥16.7mmol/L者确定为DM模型，N组注射等量的枸橼酸缓冲液。DM组成模后，随机分为DM未治疗组（D）、缬沙坦小、大剂量（10、30mg·kg-1·d-1）治疗组（Dval1、Dval2）

5、各8只。缬沙坦由北京诺华制药有限公司提供。Dval1组、Dval2组每日灌胃给药1次，D组、N组予等量蒸馏水灌胃，共12in，离心，分离上清-70℃保存。AngⅡ浓度测定采用125IAngⅡ标记的放射免疫分析，以SN682B3型放射免疫γ计数器记录结果。血浆、心肌AngⅡ浓度分别用pg/ml和pg/100mg作单位。本试剂盒测定范围10～2000pg/ml,批内变异系数CVm处，取左室心肌横切面。用10%福尔马林固定，石蜡包埋，制片，切片厚约6μm。饱和苦味酸天狼星红染色法使胶原特殊染色，心肌细胞

6、呈黄色，胶原呈红色。光学显微镜下观察心肌切片胶原沉积的情况，并予拍照记录。于心肌（不包括小动脉）及心肌小动脉周围分别随机选取5个视野，Moticimagesadvanced3.0图像分析系统（麦克奥迪公司）测量每个视野下心室胶原面积和统计场总面积，两者比值即为CVF。　　1.2.5RTPCR检测大鼠心肌PDGFB、纤维连接蛋白（FN）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）mRNA的表达　　以VectorNTI5.5软件设计各基因PCR引物，由中科院开瑞公司合成。引物的核苷酸序列和扩增产物大小为：PDGFB,5′A

7、CGCGTACAGAGGTGTTCCAG3′和5′GGGTCACTGTGGCCTTCTTG3′,219bp；纤维连接蛋白(FN)，5′TGCTGGGACTTCCTACGTCG3′和5′CGTTTGAGTTGCCACCGTAAG3′,496bp；ColⅢ,5′GGAGGAATGGGTGGCTATCC3′和5′TGTCCTGGAGAGCCATTTGAG3′,601bp；βactin,5′CGGCATTGTAACCAACTGGG3′和5′CCTCTCAGCTGTGGTGGTGA3

8、′,400bp。RTPCR条件均为:逆转录55℃30min；预变性94℃3min；扩增反应运行30个循环,94℃30s，55℃1min，72℃1min；延伸72℃7min。PCR产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳,利用凝胶成像系统(BIORAD公司)进行照相和吸光度扫描。目的基因表达水平以其吸光度与内参照βactin吸光度的比值表示。　　1.3统计学处理　　计量资料以x±s表示，组间差异比较采用t检验或ANOVA检验，组间两