缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏内皮素受体基因表达的影响论文

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1、缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏内皮素受体基因表达的影响论文【摘要】目的观察血管紧张素受体拮抗剂(ARB)缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏内皮素受体A（ETA）、内皮素受体B（ETB）基因表达的影响。方法SD大鼠,制备链脲佐菌素诱导的糖尿病（DM）模型，设正常对照组、糖尿病对照组、小剂量缬沙坦治疗组（10mg·kg-1·d-1）、大剂量缬沙坦治疗组（50mg·kg-1·d-1）、极大剂量治疗组（100mg·kg-1·d-1）。9周后采用逆转录-聚合酶链反应方法观察肾脏ETA、ETB基因表达情况。结果与正常对照组相比，糖尿病对照组大鼠肾ETA、ETB基因表达明显升高

2、(P0.01)；与小剂量治疗组相比，大剂量治疗组上述指标明显改善(P0.01)；与大剂量治疗组相比，极大剂量治疗组上述指标无明显变化。结论缬沙坦通过降低肾内ETA、ETB表达而达到肾脏保护作用，而且此效应大剂量优于小剂量。【关键词】糖尿病缬沙坦内皮素受体基因表达Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofangiotensinⅡreceptorantagonistvalsartanonintrarenalmRNAexpressionsofETAandETBindiabeticrats.MethodsTheexper

3、imentalcontrolgroup(C)andfourgroupsofstreptozotocin-induceddiabeticSprague-DainedbyRT-PCRafter9alcontrol,theexpressionsofETAandETBgenesproved)byhigh-dosevalsartan(P0.01),uchbetterthanprovementayaffordtherenoprotectionbydecreasingtheintrarenalexpressionsofETAandETBmRNA.Keyein

4、hibitor，ACEI）及血管紧张素受体阻断剂（angiotensinreceptorblocker,ARB）已被作为DN临床治疗一线药物。Fujihara等［1］发现,传统剂量ARB不能完全阻滞肾脏过度激活的肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensinsystem,RAS），从而达不到完全肾脏保护作用。目前国内外文献多是ARB对糖尿病肾脏内皮素（endothelin，ET）水平影响的研究，缺乏ARB对糖尿病内皮素受体基因表达影响的研究。本研究目的在于观察缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏内皮素受体A（endothelinreceptorA，

5、ETA）、内皮素受体B（endothelinreceptorB，ETB）基因表达的影响，进一步探讨ARB对糖尿病肾病的作用机制。1材料和方法1.1动物模型制备、分组及处理雄性SD大鼠50只，78周龄，体重180220g。链脲佐菌素（STZ）65mg/kg经腹腔注入，4872h后血糖≥16.7mmol/L,确认为糖尿病模型成功。造模成功后模型鼠随机分成4组：①糖尿病组（D组），8只；②小剂量缬沙坦治疗组（DV10组），10只，缬沙坦10mg·kg-1·d-1，灌胃；③大剂量缬沙坦治疗组（DV50组），10只，缬沙坦50mg·kg-1·d-1,灌胃

6、；⑤极大剂量缬沙坦治疗组（DV100组），8只，100mg·kg-1·d-1,灌胃。设正常对照组（C组），8只。干预治疗至9周结束。动物空腹在3％水合氯醛麻醉下腹主动脉插管，接XY-1型血压监测仪记录平均动脉压，收集血标本；取肾，部分肾组织液氮保存备用。1.2实验方法1.2.1血糖测定采用罗氏血糖仪测定尾静脉血糖。1.2.2逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）总RNA的提取：取液氮保存的肾组织，一步法总RNA提取试剂盒提取RNA。逆转录：取肾组织总RNA2μg，按常规反应体系，于42℃反应50min，92℃加热５min，灭活MMLV。PCR反应

7、：ETA引物，上游5′-CGAGGTCATGAGGCTTTTGG-3′，下游5′-GTGTTTAAGCTGTTGGCGGG-3′，扩增出的cDNA序列长度787bp；ETB引物，上游5′-TGCACACCTTTCCGCAAGCACG-3′，下游5′-AGCTGGTGCCCTTCATACAGAAGGC-3′，cDNA序列长度919bp；β-actin引物，上游5′-CAGAAGGACTCCTACGTG-3′，下游5′-GCTCGGTCAGGATCTTCATG-3′，cDNA序列长度442bp。PCR反应条件设置：ETA94℃5min，94℃30s

8、、53℃45s、72℃45s（36个循环），72℃5min；ETB94℃3min，94℃45s、60℃45s、72℃45s（34个循环），72℃10m