绝经后退行性脊柱滑脱椎体软骨终板内雌激素受体表达

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1、绝经后退行性脊柱滑脱椎体软骨终板内雌激素受体表达【摘要】目的：探讨雌激素受体（ER）在绝经后退行性脊柱滑脱（DS）软骨终板内的表达及其意义。方法：用RTPCR方法检测绝经后DS与绝经前年轻女性正常腰椎(N)的软骨终板内ERmRNA的表达；ASTER凝胶成像仪照相，而后用Labimage灰度分析软件分析ER和βactin条带的强度，强度以灰度乘以面积表示。计算ER/βactin的值（D值），正常软骨终板的D值/DS软骨终板的D值≥2.0（ND/DD≥2.0）即为阳性。1.3.2ASTER凝胶成像仪下扫描，扫描结果用Labimage灰度分析软件进

2、行强度分析，强度以灰度与面积的乘积表示。1.3.3免疫组织化学法（1）终板组织经硝酸脱钙、蜡块包埋，蜡块切片（4μm）常规脱蜡水化，柠檬酸组织抗原修复液对切片进行高压抗原修复，加50μl兔抗人ERβ抗体（1∶100），室温下孵育1h，加50μl二抗，室温下孵育1015min，加100μl新鲜配制的DAB显色4min，自来水冲洗终止显色，苏木素复染，切片用酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片，对切片拍照。（2）染色阳性表达为棕黄色,无着色为阴性。以不加一抗为对照。1.3.4雌激素浓度的测定采取静脉血2ml，EDTA抗凝，离心取血清，采用酶联免疫吸附

3、的方法测定。1.4统计学处理实验数据以x-±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行分析，组间比较采用t检验和方差分析，P<0.05为有统计学意义。2结果2.1所取标本的人群特征实验组DS患者的平均年龄为55.5岁（4368岁），对照组的平均年龄为22.5岁（1827岁）；实验组和对照组人群的体重为（61.1±0.822）kg和（59.7±1.095）kg，P=0.052，两组之间无显著差异；实验组和对照组人群的BMI（体重指数）为（23.4±0.482）kg·m-2和（22.9±0.260）kg·m-2，P=0.09，两组之间无显著差异。2

4、.2ERβmRNA在腰椎软骨终板中的表达通过RTPCR检测发现ERβmRNA的表达量在DS软骨终板中明显低于正常腰椎（图1A），经灰度分析发现条带强度在DS软骨终板中为0.413±0.032，在正常腰椎软骨终板中为0.842±0.018，且ND/DD的均值为2.04（图1B），两组之间的差异有显著性（P<0.05）。2.3ERβ蛋白质在腰椎软骨终板中的表达通过MP1的合成，维持MMPs和TIMPs之间的平衡，发挥对软骨细胞的保护作用。采用同样的方法，Horst等[16]发现雌激素可以保护软骨细胞免受氧化应激的损害作用。同时雌激素可以通过调

5、节胰岛素样生长因子水平增加蛋白多糖和胶原的合成,减少细胞因子介导的软骨基质的降解[5]。上述研究表明雌激素可以促进终板软骨细胞合成、分泌蛋白多糖和Ⅱ型胶原，从而维持终板软骨的基质成分，对终板软骨发挥保护性作用。通过检测血液中雌激素浓度发现，女性在绝经后体内雌激素水平显著下降，由于ER本身处于不断合成和分解之中，受其配体雌激素的调节，雌激素水平的下降引起软骨细胞上ER数量和亲和力下调。而刘斌等[17]通过对椎体终板软骨细胞的提取和培养发现，软骨终板中的软骨细胞和关节软骨细胞的表型和功能相似。由于体内雌激素水平下降、软骨细胞上ER的下调，软骨终板基质分

6、泌下降、降解增加导致软骨终板的退变，影响葡萄糖、氧等营养物质软骨终板的渗透和椎间盘代谢废物的排除，导致髓核内低氧、低葡萄糖、低pH值、高酸的微环境，髓核细胞功能改变，基质分泌功能下降，导致椎间盘的退变。软骨终板和椎间盘的退变使其不能正常发挥其传递负荷、吸收震荡的功能，腰椎的负重力线发生改变，关节突关节负重增加，关节突关节损伤、退变、角度增加，从而发生腰椎不稳，长期的不稳逐渐进展为DS。所以，女性在绝经后体内雌激素水平的下降及软骨细胞上ER的下调可能是DS发生的原因之一。体重和BMI是引起退行性腰椎不稳的常见影响因素，而在本研究中所选取的实验组和对照

7、组在体重和BMI之间无显著差异，排除了实验组由于与对照组体重和BMI的不同而引起的DS。本研究发现，在腰椎软骨终板中存在ER，并且绝经后退行性腰椎不稳患者体内雌激素浓度较绝经前人群明显下降，软骨终板中ERmRNA和蛋白的表达量较青年女性腰椎软骨终板内显著下调，表明雌激素及其受体可能是退行性腰椎不稳的发生发展原因之一。这为我们进一步研究雌激素及其受体在退行性腰椎不稳中的作用提供了一定的理论基础。【].Spine,2005,30(5):562566.[2]BODENSD,RIEAGUCHIK,etal.Orientationofthelumbarfa

8、cetjoints:association,1996,78:403411.[3]SATOK,ATSUE,YOSHIZUM