绝经后退行性脊柱滑脱椎体软骨终板内雌激素受体表达与青年女性的差异

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1、绝经后退行性脊柱滑脱椎体软骨终板内雌激素受体表达与青年女性的差异【摘要】目的：探讨雌激素受体（ER）在绝经后退行性脊柱滑脱（DS）软骨终板内的表达及其意义。方法：用RTPCR方法检测绝经后DS与绝经前年轻女性正常腰椎(N)的软骨终板内ERmRNA的表达；ASTER凝胶成像仪照相，而后用Labimage灰度分析软件分析ER和βactin条带的强度，强度以灰度乘以面积表示。计算ER/βactin的值（D值），正常软骨终板的D值/DS软骨终板的D值≥2.0（ND/DD≥2.0）即为阳性。1.3.2ASTER凝胶成像仪下扫描，扫描结果用Labimage灰度分析

2、软件进行强度分析，强度以灰度与面积的乘积表示。1.3.3免疫组织化学法（1）终板组织经硝酸脱钙、蜡块包埋，蜡块切片（4μm）常规脱蜡水化，柠檬酸组织抗原修复液对切片进行高压抗原修复，加50μl兔抗人ERβ抗体（1∶100），室温下孵育1h，加50μl二抗，室温下孵育1015min，加100μl新鲜配制的DAB显色4min，自来水冲洗终止显色，苏木素复染，切片用酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片，对切片拍照。（2）染色阳性表达为棕黄色,无着色为阴性。以不加一抗为对照。1.3.4雌激素浓度的测定采取静脉血2ml，EDTA抗凝，离心取血清，采用酶联免疫吸附的方

3、法测定。1.4统计学处理实验数据以x-±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行分析，组间比较采用t检验和方差分析，P<0.05为有统计学意义。2结果2.1所取标本的人群特征实验组DS患者的平均年龄为55.5岁（4368岁），对照组的平均年龄为22.5岁（1827岁）；实验组和对照组人群的体重为（61.1±0.822）kg和（59.7±1.095）kg，P=0.052，两组之间无显著差异；实验组和对照组人群的BMI（体重指数）为（23.4±0.482）kg·m-2和（22.9±0.260）kg·m-2，P=0.09，两组之间无显著差异。2.2ERβmR

4、NA在腰椎软骨终板中的表达通过RTPCR检测发现ERβmRNA的表达量在DS软骨终板中明显低于正常腰椎（图1A），经灰度分析发现条带强度在DS软骨终板中为0.413±0.032，在正常腰椎软骨终板中为0.842±0.018，且ND/DD的均值为2.04（图1B），两组之间的差异有显著性（P<0.05）。2.3ERβ蛋白质在腰椎软骨终板中的表达通过ol·L-1，排卵期为3671835pmol·L-1，黄体期为184881pmol·L-1；实验组女性患者血液平均雌激素浓度为56pmol·L-1，同绝经前相比明显降低。3讨论腰椎的稳定是其运动节段的内源性稳

5、定因素与外力负荷相互作用时的平衡状态,即一种“稳态”，而不稳则是这种“稳态”被破坏后出现的失稳状态，当这种失稳状态引发出各种临床症状时即出现了不稳症。腰椎的运动节段包括1个椎体间关节和2个关节突关节，正常情况下这3个关节维持着机械性平衡,但如果其中1个出现异常,则最终将破坏这种平衡而使运动节段失去稳定性。过去认为关节突关节的退变、损伤、角度的增加是引起腰椎失稳的主要原因，但Love等[4]指出小关节角度的增加是小关节炎重建的结果，而不是DS的起始病；并且早在1989年国内学者就已指出，腰椎间盘的退变可引起椎间盘高度下降,关节突关节囊松弛而重叠加大,黄韧带回缩

6、变厚,从而导致腰椎内在力学因素的改变,出现腰椎负重力线的重新分布,使相邻节段的椎体不稳[7]。Imada等[8]通过病例对照研究发现卵巢切除后病人DS的发病率是非切除病人的3倍，他们认为这是由于卵巢切除造成体内雌激素水平急剧下降而使椎旁韧带系统的弹性丧失造成的，而忽略了椎间盘在这其中的作用。Yves等[9]通过研究雌激素替代和非替代治疗的绝经后妇女椎间盘高度发现，替代治疗组能够显著维持椎间盘的高度。这些研究表明雌激素有维持椎间盘高度、防止椎间盘退变的作用。椎间盘是由软骨终板、纤维环和髓核构成，由于椎间盘是全身最大的无血管组织，其营养主要依赖于软骨终板的渗透作

7、用，因此椎间盘功能的维持依赖于软骨终板的功能。软骨终板是由软骨细胞及其分泌的基质Ⅱ型胶原、蛋白多糖和水组成。Richmond等[5]通过RTPCR和免疫组化的方法证明了成人软骨细胞中ERα、ERβ的mRNA表达和ER蛋白的存在，表明软骨是雌激素敏感组织。在本研究中通过RTPCR和MP1的合成，维持MMPs和TIMPs之间的平衡，发挥对软骨细胞的保护作用。采用同样的方法，Horst等[16]发现雌激素可以保护软骨细胞免受氧化应激的损害作用。同时雌激素可以通过调节胰岛素样生长因子水平增加蛋白多糖和胶原的合成,减少细胞因子介导的软骨基质的降解[5]。上述研究

8、表明雌激素可以促进终板软骨细胞合成、分泌蛋白多糖和Ⅱ