肾细胞癌组织中△np63和mdm2蛋白的表达及其

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1、肾细胞癌组织中△Np63和MDM2蛋白的表达及其【摘要】目的探讨△Np63和MDM2蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭与转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法，检测76例肾细胞癌和14例正常肾组织中△Np63和MDM2蛋白的表达。结果肾癌组织与正常肾组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=28.34、22.57,q=6.471～12.529,P<0.05）；不同病理类型的肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异均无显著性（q=0.093～2.169,P>0.05）；不同临床分

2、期肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=24.59、10.82,q=4.694～11.971,P<0.05）。△Np63和MDM2蛋白的表达存在着显著相关性（rs=0.513,P<0.05）。结论△Np63和MDM2蛋白可以作为反映肾细胞癌侵袭和转移潜能的生物学指标。【关键词】肾肿瘤△Np63原癌基因蛋白质cmdm2免疫组织化学　　［ABSTRACT］ObjectiveToexploretheexpressionsof△Np63andMDM2proteinsinrenalcel

3、lcarcinoma(RCC)andtheirrelationshiporinvasionandmetastasis.MethodsUsingimmunohistochemicalmethod,△Np63andMDM2in76RCC,and14normalrenaltissuesalrenaltissuesho(F=28.34,22.57;q=6.471-12.529;P<0.05);aybeusedasbiologicalparametersreflectinginvasionandmetastasis

4、ofthiscancer.［KEYDM2蛋白在肾细胞癌中的表达情况及其意义，探讨二者在肾细胞癌发生发展中可能发挥的作用，从而为临床早期判断肾癌的生物学行为和寻求新的治疗途径提供参考资料。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料实验组76例标本均为我院2000～2006年间手术切除的肾细胞癌标本。其中男46例，女30例；年龄34～85岁，平均56.2岁。病理学分型为：透明细胞癌48例，嗜色细胞癌10例，嫌色细胞癌5例，未分类型及其他13例。ROBSON分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期14例，Ⅳ期17例。

5、有淋巴结转移31例，无淋巴结转移45例。对照组14例肾组织均取自离肿瘤2cm以上的正常肾组织。　　1.2方法　　1.2.1主要试剂及　　小鼠抗人MDM单克隆抗体（Dako公司），△Np63鼠抗人单克隆抗体浓缩液(SantaCruz公司)，SP免疫组化试剂盒（通用型），DAB显色试剂盒，EDTA抗原修复缓冲液和柠檬酸抗原修复缓冲液（福建迈新公司）。　　1.2.2免疫组织化学染色　　石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，0.01mmol/LPBS冲洗5min,共3次。根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复（其

6、中P63为柠檬酸，pH6.0修复，MDM2为EDTA，pH8.0修复）。每张切片滴加体积分数为0.03的H2O2双蒸水溶液，室温下放置10min，用PBS振洗5min,共3次。滴加正常非免疫动物血清，室温放置10min，甩去多余液体不洗。滴加适当稀释的一抗（P63为1∶100，MDM2为1∶75），于湿盒内室温下放置1h，PBS振洗5min,共3次。滴加生物素化二抗，置湿盒内室温放置15min，PBS振洗5min,共3次。滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液，置湿盒内室温放置15min，PBS振洗5min,

7、共3次。DAB显色，镜下观察，自来水冲洗中止显色。复染核，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。阳性对照和阴性对照分别采用已知的阳性切片和PBS代替一抗，步骤与前相同。　　1.2.3结果判定　　利用德国SimplePCI图像分析系统进行灰度测量，将免疫组化染色结果转化为灰度值进行定量分析。每张切片以组织间质空白处入射光的值为定标，在200倍镜下每张切片选取5个视野，分别测定间质灰度和肾癌灰度，取其平均值，作为△Np63和MDM2蛋白表达测定值，测定值＝间质灰度值-癌组织灰度值。　　1.2.4统计学处理　　应用

8、SPSS11.0统计学分析软件进行统计学处理。组间比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNK法，蛋白表达之间的相关分析采用Spearman法。　　2结果　　2.1△Np63、MDM2蛋白的表达实验组中△Np63蛋白主要表达于肾癌细胞细胞核，呈棕黄色颗粒，MDM2主要表达于肾癌细胞细胞核；对照组中△Np63和MDM2蛋白少量表达于近曲、远曲肾小管上皮细胞细胞核。14例正常肾组织中△N