肾细胞癌及癌旁组织中tip30蛋白的表达及临床意义

《肾细胞癌及癌旁组织中tip30蛋白的表达及临床意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达及临床意义【摘要】目的探讨肾细胞癌组织中Tat结合蛋白（TIP30）的表达及其临床意义。方法采用SP免疫组织化学染色法对65例肾细胞癌组织及其癌旁组织中TIP30蛋白表达进行检测。同时采用的肾脏组织，并经病理学检查未见癌细胞。　　肾癌石蜡标本取自我院2006年6月至2007年12月肾癌手术病例65例,均经病理组织学确诊,手术前均未接受化疗及放疗。其中透明细胞癌46例，颗粒细胞癌6例，混合细胞癌13例。年龄17～75(平均56.4)岁,男性46例,女性19

2、例。局限于肾内者53例,穿透肾包膜者12例,有局部淋巴结转移者9例,有静脉癌栓形成者5例。Robson分期Ⅰ、Ⅱ期者53例，Ⅲ、Ⅳ期者12例。癌旁组织为距肿瘤组织≥5cm处的肾组织。　　1.2试剂兔抗人TIP30IgG多抗购自英国Abcam公司,SP免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术公司。Western印迹试剂盒购自碧云天生物技术研究所。　　1.3实验方法　　1.3.1免疫组织化学采用SP免疫组化染色法进行检测，主要操作步骤如下:石蜡切片标本经常规脱蜡,抗原高压修复,

3、消除内源性过氧化物酶,山羊血清封闭非特异性抗原,加一抗(工作浓度为1∶100)4℃冰箱过夜,第2天切片恢复室温后,依次加生物素标记的二抗及链霉菌抗生物素过氧化物酶溶液,DAB显色,苏木素复染,梯度乙醇脱水,二甲苯透明封片。用PBS代替一抗作阴性对照。　　1.3.2Western印迹在低温下使用研钵将新鲜肾癌组织及配对癌旁正常组织磨成粉末状，加入蛋白裂解缓冲液及蛋白酶抑制剂,离心吸出上清,分装,测蛋白浓度后置-70℃冰箱保存。配制聚丙烯酰胺凝胶,将变性蛋白样品加入缓冲液,蛋白凝胶电泳,然后转膜(

4、PVDF膜)，用5%的脱脂奶粉封闭PVDF膜上的蛋白潜在结合位点,加入一抗(工作浓度为1∶400)4℃过夜,加入二抗后ECL试剂显色、照相。　　1.4结果判断免疫组化结果以胞浆内出现淡黄色至棕黄色颗粒为阳性细胞标志，采用双盲法，计数10个高倍视野，计算阳性细胞占细胞总数的百分率。染色结果分为阴性(-):细胞无染色或很弱，阳性细胞率＜5%；弱阳性（+）：细胞染色为淡黄色，阳性细胞率为5%～25%；阳性（）：细胞染色强度介于弱阳性与强阳性之间，阳性细胞率为26%～50%；强阳性（）：细胞染色为黄

5、色至棕黄色，阳性细胞率＞50%。Western印迹结果采用BioRad图像分析系统分析目的蛋白及内参蛋白的IOD值，以相对积分光密度（TIP30的IOD值/GAPDH的IOD值）比较蛋白表达高低。计算每组均值(x±s)，比较癌组织与癌旁组织间的表达差异。　　1.5统计学方法采用SPSS10.0统计软件,两因素间的差异比较及相关性分析采用χ2检验。　　2结果　　2.1TIP30蛋白Western印迹分析结果Western印迹结果显示，TIP30蛋白在77.3%(17/22)肾癌组织中的表达水平明

6、显低于对应的癌旁肾组织,在22.7%(5/22)肾癌组织中的表达水平与癌旁肾组织无明显差异。肾癌组与癌旁组比较，肾癌组蛋白相对表达量为0.405±0.152，明显低于癌旁对照组的0.712±0.193(P＜0.05)。TIP30分子量为30kD，GAPDH分子量为40kD。见图1。　　图1Western印迹检测TIP30蛋白在肾癌(C)与配对癌旁组织(N)中的表达差异（略）　　2.2TIP30蛋白SP免疫组织化学染色结果分析　　2.2.1TIP30蛋白表达与肾细胞癌侵袭、转移的关系TIP30蛋

7、白主要表达于胞质,阳性染色细胞呈浅黄色至棕黄色颗粒，在肾近曲小管和远曲小管表达量高(图2)。TIP30蛋白在肾细胞癌和癌旁组织都能检测到表达。65例肾原发癌组织中，TIP30蛋白阴性32例，阴性表达率为49.2%；65例癌旁组织中，TIP30蛋白阴性表达7例，阴性表达率为10.8%；12例穿透肾包膜的癌组织中，TIP30蛋白阴性表达9例，阴性表达率为75%；9例肾细胞癌转移淋巴结癌组织中，TIP30蛋白阴性表达6例,阴性表达率为66.7%；5例肾细胞癌静脉癌栓中,TIP30蛋白阴性表达3例，阴性

8、表达率为60%。各组与原发癌组之间的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。见表1。　　图2肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达(×400)（略）　　表1TIP30表达与肾癌侵袭、转移的关系（略）　　与肾原发癌组织比较：1）P＜0.05，2）P＜0.01　　2.2.2TIP30蛋白与肾细胞癌临床分期的关系按Roboson分期，Ⅰ～Ⅱ期的53例肾细胞癌组织中,TIP30蛋白阴性表达24例,阴性表达率为45.3%；Ⅲ～Ⅳ期的12例肾细胞癌组织中，TIP30蛋白阴性表达10例,阴性表达率为