肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达及临床意义.doc

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1、肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达及临床意义【摘要】目的探讨肾细胞癌组织中Tat结合蛋口(TIP30)的表达及其临床意义。方法采用SP免疫组织化学染色法对65例肾细胞癌组织及其癌旁组织中TIP30蛋白表达进行检测。同时采用Western印迹方法检测22例肾细胞癌及其癌旁新鲜标本屮TIP30蛋白的表达。结果免疫组化结果显示，TTP30蛋白阴性表达率在肾癌组中为49.2%(32/65),显著高于癌旁组织(10.8%(7/65))(P<0.01)差异有统计学意义:TTP30蛋白的阴性表达在肾癌各病理类型中差异无统计学意义(P>o.05)；TIP30蛋白在肾细胞癌中的阴性表达与浸润程度(P

2、<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)以及肾静脉癌栓有关(P<0.05)oWestern印迹结果显示在77.3%(17/22)的肾细胞癌组织中有TTP30蛋白低表达。结论TIP30蛋白的阴性表达与肾细胞癌发生、发展有关;作为抑癌基因产物,TTP30蛋白可在蛋白质水平为临床估计病情及预后提供-个有意义的客观指标。【关键词】肾细胞癌；TTP30蛋白；免疫组化；Western印迹TTP30,是一种30kD的Tat(Transactivatoroftranscription)结合蛋白(TatInteractiveProtain),又称HTATIP2(HIV1Tatinteractiveprot

3、ein2),是近年来国外学者发现的一种肿瘤转移抑制基因(1,2),其编码产物TTP30/CC3蛋白具有丝氨酸、苏氨酸激酶活性，可特异地调节基因转录〔1,3）oTIP30/CC3基因敲除小鼠的研究表明，缺失TTP30/CC3的小鼠能自发引起肝细胞癌、膀胱移行细胞癌、平滑肌瘤、卵巢脂肪细胞瘤和血管肉瘤等肿瘤的发生〔4）。冃前,TIP30与肾细胞癌的关系尚未见报道。本研究采用SP免疫组织化学染色法及免疫印迹朵交实验（Western印迹），对肾细胞癌组织及其癌旁组织中的TIP30蛋口进行了检测，旨在探讨肾细胞癌中TIP30蛋白的表达情况及临床意义，认识TTP30蛋白在肾细胞癌发生、发展中的作用。

4、1材料与方法1.1一般资料肾癌新鲜组织标本取自我院2006年9月至2007年5月肾癌手术病例，均经病理学检查确诊，共22例。男性13例，女性9例;年龄31-68（平均61.5）岁。其中透明细胞癌14例,颗粒细胞癌5例，混合细胞癌3例。Robson分期为I、I【期者17例,III、IV期者5例。全部标本于手术吋收集，并立即放入液氮中冻存。肾癌组织取自原发癌灶，癌旁肾组织取自距癌灶25cm的肾脏组织，并经病理学检查未见癌细胞。肾癌石蜡标本取自我院2006年6月至2007年12月肾癌手术病例65例,均经病理组织学确诊，手术前均未接受化疗及放疗。其中透明细胞癌46例，颗粒细胞癌6例，混合细胞癌1

5、3例。年龄17〜75（平均56.4）岁，男性46例，女性19例。局限于肾内者53例，穿透肾包膜者12例,有局部淋巴结转移者9例，有静脉癌栓形成者5例。Robson分期I、II期者53例，IILIV期者12例。癌旁组织为距肿瘤组织25cm处的肾组织。1.2试剂兔抗人TIP30IgG多抗购自英国Abeam公司，SP免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术公司oWestern卬迹试剂盒购口碧云天生物技术研究所。1.3实验方法1.3.1免疫组织化学采用SP免疫组化染色法进行检测,主要操作步骤如.H:石蜡切片标本经常规脱蜡，抗原高压修复，消除内源性过氧化物酶，山羊血清封闭非特异性

6、抗原，加一抗（工作浓度为1：100）4°C冰箱过夜，第2天切片恢复室温后，依次加生物素标记的二抗及链霉菌抗生物素过氧化物酶溶液,DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明封片。用PBS代替一抗作阴性对照。1.3.2Western印迹在低温下使用研钵将新鲜肾癌组织及配对癌旁正常组织磨成粉末状，加入蛋白裂解缓冲液及蛋白酶抑制剂,离心吸出上清，分装，测蛋口浓度后置-70°C冰箱保存。配制聚内烯酰胺凝胶，将变性蛋白样品加入缓冲液，蛋白凝胶电泳，然后转膜（PVDF膜），用5%的脱脂奶粉封闭PVDF膜上的蛋口潜在结合位点，加入一抗（工作浓度为1：400）4°C过夜，加入二抗后ECX试剂显色、照

7、相。1.4结果判断免疫组化结果以胞浆内出现淡黄色至棕黄色颗粒为阳性细胞标志，采用双盲法，计数10个高倍视野，计算阳性细胞占细胞总数的百分率。染色结果分为阴性（-）：细胞无染色或很弱，阳性细胞率V5%；弱阳性（+）：细胞染色为淡黄色，阳性细胞率为5%〜25%；阳性（）：细胞染色强度介于弱阳性与强阳性之间，阳性细胞率为26%〜50%；强阳性（）：细胞染色为黄色至棕黄色，阳性细胞率＞50%。Western印迹结果采用BioRad图像分析系