p16与c-myc基因表达产物在肝细胞癌及癌旁组织中的表达及临床意义

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1、p16与c-myc基因表达产物在肝细胞癌及癌旁组织中的表达及临床意义　　中国现代医学杂志1999年第9卷第3期史宪杰　李开宗　窦科峰　高志清　张传山　胡沛臻　马福成　　目的：探讨p16、c-myc蛋白与肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的发生、发展及恶性程度的关系。方法：应用免疫组织化学法检测了69例HCC和63例癌旁组织p16及c-myc蛋白的表达，并结合临床资料进行分析。结果：p16蛋白主要分布在胞浆，少数细胞核内也可见阳性显色。c-myc蛋白主要分布在胞核。p16蛋白在肝癌组织及癌旁组织中的阳

2、性率分别为26.5%(18/69)和92%(58/63)，两者比较差异显著(P＜0.01)。69例HCC标本，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中p16蛋白的检出率分别为52.6%(10/19)，23.3%(7/30)，5%(1/20)，p16蛋白在高分化HCC中的表达率明显高于低分化HCC组(P＜0.05)。c-myc蛋白在癌组织及癌旁组织中的阳性率分别为85.5%(59/69)和39.7%(25/63)，两者比较差异显著(P＜0.05)。结论：抑癌基因p16和c-myc基因的表达和分布与HCC发生、发展及临床预后有密切的关系。检测抑癌基因p16

3、和c-myc基因对指导临床治疗有重要的参考价值。　　关键词：肝细胞癌　基因表达　免疫组织化学　　肿瘤的发生是一个多因素、多阶段作用过程，原癌基因及其激活形式的癌基因出现表达异常或其结构发生改变，以及抑癌基因的失活与突变，可导致细胞发生癌变。p16蛋白是近年发现的可与细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)结合调节细胞周期的抑癌基因，当p16基因缺失或突变而不能正常表达时，细胞则失去控制发生癌变。c-myc是常见的激活癌基因。我们应用免疫组织化学技术检测了69例原发性肝细胞癌和63例癌旁肝细胞中p16和c-myc蛋白的分布与表达，对p16

4、、c-myc基因与肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生、发展及恶性程度的关系并结合临床有关资料进行了探讨，报告如下。　　1　材料和方法　　1.1　标本收集　　69例HCC标本均为第四军医大学西京医院外科手术及活检标本，组织经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，5μm连续切片，分别作HE染色和免疫组织化学染色。根据WHO标准进行病理诊断与分级，其中Ⅰ级19例，Ⅱ级30例，Ⅲ级20例。　　1.2　抗体与试剂　　鼠抗p16及c-myc单克隆抗体均购自美国SantaCruzbiotechnology,Inc

5、.DAKOEnVisionTMSystem两步法免疫组织学染色试剂盒购自DAKO公司。　　1.3　方法与步骤　　石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶活性，室温下10min，PBS振洗5min×3，浸泡于10mmol/L柠檬酸缓冲液中(pH6.0)，微波修复抗原10min，自然冷却至室温后蒸馏水洗涤，PBS振洗5min×3，10%正常山羊血清封闭非特异背景染色37℃30min，切片加鼠抗p16单克隆抗体(1：150)，鼠抗c-myc单克隆抗体(1：100)，4℃过夜，37℃复温30min，PBS振洗5min×3

6、，切片加mouseenVisionTM37℃30min，PBS振洗5min×3，DAB显色，苏木精衬染，乙醇梯度脱水，二甲苯透明树脂封片观察。　　1.4　对照试验　　阳性对照：用己知p16及c-myc阳性的切片重复染色；空白对照：用PBS代替第一抗体；替代对照：用正常鼠血清代替第一抗体。　　2　结果　　p16及c-myc蛋白免疫组织化学性阳性信号为棕黄色颗粒，p16蛋白主要分布在胞浆，少数细胞核内也可见阳性显色，c-myc蛋白主要分布在胞核。69例HCC标本中有63例带有癌旁组织，p16在癌组织及癌旁组织中的阳性率分别为26.5%

7、(18/69)和92%(58/63)，两者比较差异显著(P＜0.01)。根据WHO标准进行病理诊断与分级，69例HCC标本，其中Ⅰ级19例，Ⅱ级30例，Ⅲ级20例。Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中p16蛋白的检率分别为52.6%(10/19)、23.3%(7/30)、5%(1/20)，p16在高分化HCC中的表达率明显高于低分化HCC组(P＜0.05)。c-myc蛋白在癌组织及癌旁组织中的阳性率分别为85.5%(59/69)和39.7%(25/63)，两者比较差异显著(P＜0.05)，而与HCC细胞分化程度呈负相关性(P＜0.05)。实验数据的

8、统计分析采用卡方检验。　　3　讨论　　1993年，Serrano［1］首先发现了一种新型抑癌基因p16可与细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)结合调节细胞周期，干扰细胞周期素D与CDK4结合，阻止细胞从G1期进入S期。抑癌基因p16是正常细胞周期的调