胃癌发生发展中可溶型ｆａｓ／ｆａｓｌ的表达及其意

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1、胃癌发生发展中可溶型Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表达及其意【摘要】探讨Ｆａｓ／ＦａｓＬ基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交技术，对２０例正常胃黏膜，２２例癌前病变和３５例胃癌组织中Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表达情况加以分析。结果：正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Ｆａｓ阳性率分别为８5％、４5％、３7％；ＦａｓＬ的阳性率分别为20％、２7％、４6％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交显示：胃癌细胞产生的Ｆａｓ蛋白以分子量３０　ｋＤａ的可溶型Ｆａｓ（ｓＦａｓ）为主，伴少量的４３　ｋＤａ膜型Ｆａｓ（ｍＦａｓ）。结论：Ｆａｓ在正常

2、胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性（Ｐ＜００５）；ＦａｓＬ在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性（Ｐ＜００５）。【关键词】胃癌Ｆａｓ／ＦａｓＬ基因表达免疫逃逸细胞凋亡ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　Ｆａｓ，ＦａｓＬ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉ

3、ｓｔｒｙ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｍ　ｂｌｏｔ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　Ｆａｓ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ，ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　８5％，４5％　ａｎｄ　３7％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＦａｓＬ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ，ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｃａｒｃｉｎ

4、ｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　20％，２7％　ａｎｄ　４6％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇ：ｔｈｅ　ＭＷ　ｏｆ　Ｆａｓ　ｉｓ　３０　ｋＤａ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｙｌｅ　ｏｆ　Ｆａｓ　ｉｓ　ｓｏｌｕｂｌｅ　Ｆａｓ（ｓＦａｓ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｆａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ，ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜００５）．ＦａｓＬ　

5、ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ，ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜００５）．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　Ｆａｓ／ＦａｓＬ；ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｅｓｃａｐｅ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ胃癌是发病率较高的恶性肿瘤之一，发病机制尚不十分清楚。Ｆａｓ（ＣＤ９５／ＡＰＯ１）是肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）一神经生长因子（ＮＧＦ）受体超家族成员，它通过与其配件（

6、Ｆａｓｌｉｇａｎｄ，ＦａｓＬ）相互作用，调控细胞的生存和凋亡［１］。研究表明：Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统的异常表达，不仅参与胃癌过程中细胞凋亡异常的调节，而且与胃上皮细胞癌变及免疫逃逸有关［２］。本文通过检测正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织ＦａｓＦａｓＬ的表达，探讨其在胃癌发生、发展中的作用。１材料和方法１１组织２０例正常胃黏膜、２２例癌前病变和３５例胃癌组织（人正常胃黏膜和胃癌手术切除）标本选自本室与中国医科大学附属第一医院肿瘤外科共建瘤库。标本在术后２　ｈ内获取，液氮速冻后，－７０℃保存。１２主要试剂兔抗人Ｆａｓ、ＦａｓＬ抗体（Ｓａｎｔ　Ｃｒｕ

7、ｚ，ＵＳＡ）购自北京中山生物技术公司；增强化学荧光蛋白检测（ＥＣＬ）试剂盒系英国Ａｍｅｓｈａｍｅ公司产品；ＡＢＣ试剂盒为美国Ｖｅｃｔｏｒ公司产品。１３方法１３１冰冻组织切片将冰冻切片机（Ｌｅｉｃａ　１８００型）的操作箱用１００％乙醇擦洗数次，以灭活蛋白酶；温度降至－２０℃左右，然后按常规方法做以上组织的冰冻切片。１３２免疫组织化学染色将上述切片做ＨＥ染色，组织病理学观察，选择病变典型的切片用冷丙酮固定，－２０℃保存，用于免疫组织化学染色。抗Ｆａｓ－ＦａｓＬ抗体的工作浓度均为１∶１００。以食道鳞状上皮为阳性对照。ＡＢＣ免疫组织化学染色的步

8、骤按文献［３］所述方法进行。１３３特定组织的蛋白提取冰冻组织的连续切片，ＨＥ染色，组织病理学观察。若有多种组织存在，则按本研究室建立