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《胃癌发生发展中可溶型Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表达及其意义.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、胃癌发生发展中可溶型Fds/FasL的表达及其意义【摘要】探讨Fas/FasL基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Westem印迹杂交技术，对20例正常胃黏膜，22例癌前病变和35例胃癌组织屮Fas/FasL的表达情况加以分析。结果：正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Fas阳性率分别为85%、45%、37%；FasL的阳性率分别为20%、27%、46%。Western印迹杂交显示：胃癌细胞产生的Fas蛋白以分子量30kDa的可溶型Fas(sFas)为主，伴少量的43kDa膜型Fas(mFas)o结
2、论：Fas在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性(P<005)；FasL在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性(PV005)。【关键词】胃癌Fas/FasL基因表达免疫逃逸细胞凋亡gatetheposFas,s.Methods：ThsandFasLpminedbyimmunohistochemstrstaining,proteinextractiondWestemblothybridization.Resuits:ThepositiveatesofFanorma1epithe1ia1cells
3、,dwerecellsandcare85%，45%and37%，ive1y.ThepositiveratnormaSticcellsandcarcwere20%,27%and46%，ing：theMWoandthestyleofFasiseFas(sFas)•Cone1usion：Faexpressionissignificantfferentbetweennormalepiia1cellsanddysplasticcIs,carcinoma1s(P<005).Fapressionicanterentbetwecarenomaa
4、ndnormalsp1asticce(P<005).KeywordsgastriccarcinomaFas/FasL；geneexpression；immunologicescape；apoptosis胃癌是发病率较高的恶性肿瘤之一，发病机制尚不十分清楚。Fas(CD95/APO1)是肿瘤坏死因子(TNF)—神经生长因子(NGF)受体超家族成员，它通过与其配件(Fasligand,FasL)相互作用，调控细胞的生存和凋亡［1研究表明：Fas/FasL系统的异常表达，不仅参与胃癌过程中细胞凋亡异常的调节，而且与胃上皮细胞癌变及免疫
5、逃逸有关［2本文通过检测正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织FasFasL的表达，探讨其在胃癌发生、发展中的作用。1材料和方法11组织来源20例正常胃黏膜、22例癌前病变和35例胃癌组织(人正常胃黏膜和胃癌手术切除)标本选自本室与中国医科大学附属第一医院肿瘤外科共建瘤库。标本在术后2h内获取，液氮速冻后，一70°C保存。12主要试剂兔抗人FasFasL抗体(SantCruz,USA)购自北京中山生物技术公司；增强化学荧光蛋白检测(ECL)试剂盒系英国Ameshame公司产品；ABC试剂盒为美国Vector公司产品。13方法131冰冻组
6、织切片将冰冻切片机(Leica1800型)的操作箱用100%乙醇擦洗数次，以灭活蛋白酶；温度降至一20°C左右，然后按常规方法做以上组织的冰冻切片。132免疫组织化学染色将上述切片做HE染色，组织病理学观察，选择病变典型的切片用冷丙酮固定，一20C保存，用于免疫组织化学染色。抗Fas-FasL抗体的工作浓度均为1：100o以食道鳞状上皮为阳性对照。ABC免疫组织化学染色的步骤按文献［3］所述方法进行。133特定组织的蛋白提取冰冻组织的连续切片，HE染色,组织病理学观察。若有多种组织存在，则按本研究室建立的特定组织选择法［4］进行
7、蛋白提取。选择切片总体积约2mmX2mmX2mm,立即用加样器吸头将其移至含50U112X1aemm1iSDSsamp1ebuffer,超声破碎，加热5min,15000r/min离心5min,取上清，用紫外分光光度计进行蛋白浓度然后调整浓度至4g/L,-70°C保存备用。134蛋白分析取100ug蛋白样本，在10%SDSPAGE中电泳分离，蛋口按常规行电转移，恒流80mA,过夜。固相支持物为硝酸纤维素膜。5%脱脂奶粉(DIFCO1aboratories,USA),05%Tween20封闭45min,以稀释度为1：500的Fas
8、、FasL抗体与膜上靶蛋白孵育45mino辣根过氧化物酶偶联的猪抗兔抗体(Dako,Denmark)作用后，用ECL荧光显色系统曝光显色。135统计学分析数据进行x2检验。免疫组织化学染色的结果显示：Fas在正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的阳性率分别为85%、4
