银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠肺组织结缔组织生长因子表达的影响

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1、银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠肺组织结缔组织生长因子表达的影响：刘霞　许朝霞　曹秀荣　丁明桥【摘要】目的观察银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠肺组织中结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法96只健康ethods96healthyA5。批号：040601，天津太河制药有限公司生产)，每支8mg，用1ml生理盐水配置备用。醋酸强的松片（广东华南制药厂生产，批号041201），在使用时用蒸馏水溶解，配成0.32g/L混悬液备用。银杏叶提取物选用依康宁片（扬子江集团有限公司生产，批号：05012801，每粒含总黄酮醇苷19.2mg，萜类内酯4.8mg，剂量按照总黄酮醇苷与萜类内酯总剂量计算），用蒸

2、馏水溶解制成0.675g/L混悬液备用。　　1.2试剂　　DAB、SABC免疫组化试剂盒、抗CTGF抗体、苏木素均购自武汉博士德生物工程有限公司；PBS溶液、4%多聚甲醛由湖北中医学院实验中心提供；双氧水及乙醇购自于武汉市江北化学试剂有限责任公司；环氧树脂812，由湖北省武警总医院病理室提供。　　1.3仪器　　显微摄影装置为OlympusPM-10AD，Olympus光学显微镜。　　1.4动物分组、造模及喂养　　96只健康g/(kg·bl/(kg·bg/(kg·bl/kg·bg/ml，剂量为10ml/kg·bl/kg·bm厚的薄片，继续用4%多聚甲醛固定72h，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，石蜡

3、定向包埋，连续切片，厚度6μm，每隔5片取一片，每份组织取10片备用，然后在60℃的温水中充分展开，用玻片贴片。　　1.6CTGF表达的检测　　免疫组化染色具体步骤严格按试剂盒说明操作。　　2结果　　与A组比较，各时间点B，C，D组CTGF表达均显著增高（P＜0.01）。与B组比较，各时间点，C，D各组CTGF表达均低于B组（P＜0.01或0.05）。各组大鼠肺组织CTGF表达量见表1。表1各组大鼠肺组织CTGF表达阳性细胞率的比较（略）　　3讨论CTGF是Bradham等［1］于1991年首次在人的脐静脉内皮细胞条件培养基中发现的细胞因子。它是一种富含半胱氨酸的分泌性多肽，属即刻早期基因C

4、家庭成员之一，广泛存在于成人各种组织器官，如：心、脑、肺、肝、肾等。CTGF具有促进细胞增殖、合成胶原、促进细胞黏附、增生和细胞外基质合成等作用，并参与机体组织的创伤修复过程，是一种促纤维生长因子。在生理状态时，机体组织细胞可有基础量CTGF的分泌；病理状态下，CTGF过度表达与某些增生性或纤维化性疾病的发生密切相关。当纤维化发生时，CTGF过度表达并通过调控I型胶原α2，启动转录起始位点上游379bp出CTGF的应答元件，介导TGF-β或通过自分泌作用刺激胶原合成，从而导致细胞外基质中纤维连接蛋白（FN）和胶原蛋白的过度沉积［2］。　　大量的文献报道认为TGF-β是促进肺、肝、肾等脏器纤维

5、化发生发展的关键因子［3］，是组织纤维化过程中始发的致纤维化因子。但近年来的研究表明，TGF-β具有诱导胚胎发育、细胞增生、分化、凋亡、阻止基质降解和在一定的条件下促进纤维化的作用。其单独的作用并不能引起纤维化，事实上，TGF-β促进脏器纤维化的信号是通过CTGF向下转导的［4］。CTGF是介导TGF-β1促纤维化作用的一个重要的下游因子，应用反义CTGF技术或抗CTGF中和抗体可以阻断TGF-β1引起的促纤维化效应［5］。还有研究发现在小鼠的皮肤纤维化模型中，TGF-β1可以引起短期的纤维化组织增生，而同时注射CTGF则可以引起持续稳固的纤维组织增生［6］。近期有实验进一步证实［7］，CT

6、GF蛋白的表达与肺纤维化的程度密切相关，且作为上游因子TGF-β1在肺纤维化中的表达规律与CTGF几乎完全一致，并与CTGF升高成正比。　　本实验中，我们观察到CTGF蛋白在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型肺组织中的表达显著增加，高于正常组和强的松、银杏叶提取物干预组，进一步证实了CTGF的表达与肺纤维化的程度密切相关。同时也观察到银杏叶提取物能有效减少CTGF在肺组织中的表达。故我们认为，CTGF在肺纤维化发生发展过程中可能起着重要作用；银杏叶提取物可能通过抑制肺组织中CTGF蛋白的表达而对肺纤维化大鼠起治疗作用。由于CTGF在正常生理状态下表达水平较低，生物学效应单一，又可能在肺间质纤维化

7、的过程中起着极其重要的作用，故开发能抑制CTGF的产生和激活的药物将会有可能逆转肺间质纤维化，为探索纤维化疾病的治疗策略提供新的思路。【参考文献】　　［1］何明，张晓梅，苑惠青，等．银杏叶提取物治疗肺纤维化的临床研究［J］．中国中西医结合杂志，2005，25（3）：222.　　［2］HolmesA,AbrahamDJ,SusanS,etal.CTGFandAMADs,Maintenanceofsclerpde